[发明专利]一种黑素细胞与角质形成细胞共培养用培养基

说明书

本发明公开了一种用于黑素细胞与角质形成细胞共培养用培养基，包括角质细胞无血清培养基，添加有胰岛素、氢化可的松、牛脑垂体提取物、上表皮生长因子、碱性成纤维生长因子、角质细胞生长因子和12‑O‑十四烷酰佛波醇‑13‑乙酸酯，以及整合素α3β1。本发明培养基中含有的整合素α3β1和12‑O‑十四烷酰佛波醇‑13‑乙酸酯具有快速促进黑素细胞在基底膜上贴壁的作用，使黑素细胞固定存在于基底层，并与基底角质形成细胞以固定比例排列于基底层的特点，可使两种细胞均迅速增殖，黑色素细胞在皮肤基底层内散在分布，细胞突起伸入到角质形成细胞之间，银染法染色显示黑素细胞内及重组皮肤切面有大量色素颗粒存在，黑素细胞增殖状态良好。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种黑素细胞与角质形成细胞共培养用培养基。背景技术

人类皮肤颜色的形成主要是黑素细胞产生并分泌的黑素小体到达角质形成细胞，并在角质形成细胞中重新分布。建立人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养模型可以为研究皮肤色素发生发展机制提供研究平台。生理情况下，黑素细胞可以通过树突与周围角质形成细胞发生接触和联系，角质形成细胞通过直接的细胞间连接控制黑素细胞的生长、形态、树突形成和抗原表达。

黑素细胞与角质形成细胞直接接触共培养分为单层细胞共培养和重建三位表皮结构的共培养，前者比较简便，能为研究黑素细胞和角质形成细胞提供较理想的体外模型，因而被大多数学者所采用，但这种模型并不能形成类似于皮肤的细胞复层化结构，与皮肤正常生理结构存在一定的差距。后者能够准确的模拟表皮黑素单元，为体外研究黑素细胞与角质形成细胞相互作用，色素的转移与分布提供了良好的模型基础。

目前含黑素重组人工皮肤存在的问题有基底层黑素细胞贴壁不牢，组织银染切片显示基底层黑素细胞缺失或黑素细胞量少，本应存在于基底层的黑素细胞漂移至角质层，导致重组出的人工皮肤与正常人皮肤黑素细胞存在位置不一致，虽然形成的重组人工皮肤有色素沉积的表观颜色，但不能形成类似于正常人皮肤的表皮黑素单元，为研究黑素细胞与角质形成细胞之间相互作用及色素转移等方面造成障碍。

CN03134539.5可调节色素分泌的组织工程皮肤及其构建方法、CN201510795792.0一种含黑色素的体外皮肤测试模型及其制备方法、美国专利US2009/0239254A1功能性色素沉积皮肤评价、日本专利JP2008029342(A)表皮黑素形成能力等同物的制备方法和用途，以及法国专利EP2103687B1功能性色素沉积皮肤替代物和韩国专利KR20130056956含黑素细胞的皮肤等同物的制备，以上专利均使用了黑素细胞和角质形成细胞共培养构建体外重组皮肤，但以上的培养基中均加入了血清，含血清有可能造成细胞污染，影响角质细胞生长，加速角质细胞分化，导致模型整体存活时限缩短。另一方面由于血清和成分不明的蛋白的存在，对细胞生物学、毒理学、病理学等基础研究形成干扰。

CN201410045511.5含黑色素细胞的皮肤模型、其构建方法及用途专利中并未对所用到的黑素细胞与角质形成细胞共培养的培养基成分做详细介绍。发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于黑素细胞与角质形成细胞共培养的培养基。该培养基中含有的整合素α3β1和12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯具有快速促进黑素细胞在基底膜上贴壁的作用，使黑素细胞固定存在于基底层，并与基底角质形成细胞以固定比例排列于基底层的特点。该培养基可使两种细胞均迅速增殖，黑素细胞树突多为3～5个，黑色素细胞在皮肤基底层内散在分布，细胞突起伸入到角质形成细胞之间，银染法染色显示黑素细胞内及重组皮肤切面有大量色素颗粒存在，黑素细胞增殖状态良好。