[发明专利]多种人兽共患病病原菌的同步快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及快速检测领域，具体是多种人兽共患病病原菌的同步快速检测试剂盒。

背景技术

近年来，随着畜牧业和旅游业的飞速发展，许多人兽共患传染病的流行病学特征发生了改变，传播速度更快、传播范围更广。人兽共患传染病不仅严重威胁人类和动物的健康，还给农牧业带来巨大经济损失。布鲁氏菌、大肠杆菌O157:H7和单增李斯特菌是诸多人兽共患病病原菌中发病率较高、对人兽危害较严重的三种病原菌。人类或动物往往通过摄入被这些细菌污染的食物而发病，建立对这些病原菌的同步快速准确检测方法已经成为了公共卫生检测领域的研究热点之一。

大肠杆菌O157:H7为肠杆菌科、埃希氏菌属，革兰氏阴性菌，是肠出血性大肠杆菌中最重要的一个血清型。大肠杆菌 O157:H7的生化特性与普通大肠杆菌相似，最适生长温度为37℃，不耐高温，在75℃水中1min就可被杀死，但是在低温环境中可以长时间存活。耐酸，对氯极其敏感，1ppm就可致其死亡。大肠杆菌O157:H7是一种重要的人兽共患病病原菌，感染剂量非常低，10个活菌就可能致病。人误食被该菌污染的牛肉、猪肉、牛奶、蔬菜、水等均可能患病。

单核细胞增生李斯特菌，简称单增李斯特菌，是一种革兰氏阳性菌，在营养丰富的环境中可形成荚膜。单增李斯特菌的生长温度范围较广，为-1.5 ~ 50℃，最适生长环境为30℃、pH 4.5~7.0，热抵抗力较弱，60℃ 30min可被灭活，对酒精等化学消毒剂及紫外线照射敏感。单增李斯特菌在自然环境中存在广泛，在植物、土壤、饲料、废弃物以及人或动物的粪便中都有可能存在，动物感染该菌的可能性较大。由于其能够在相对极端的环境如低温、高盐等环境中生长，可通过多种途径引起传播，除了污染食品原料，单增李斯特菌还有可能在食品加工、运输或冷冻保存过程中传播，导致人或动物患病。单增李斯特菌作为李斯特氏菌属中对人畜危害最大的一种病原菌，也是食品卫生中一种重要的食源性病原菌，人类可通过食入被单增李斯特菌污染的食物，如奶及奶制品、猪肉、牛肉、羊肉、海产品、蔬菜、腌制食品等感染该菌。单增李斯特菌的发病率相对其他人兽共患病病原菌而言，并不是很高，但是其病死率可高达30% ~ 40%，超过了沙门氏菌和肉毒杆菌。

布鲁氏菌是一种细胞内寄生的革兰氏阴性短杆菌，主要感染羊、牛、猪等多种家畜、野生动物以及人类，威胁畜牧业的发展和人体的健康，造成巨大的经济损失，也带来严重的公共卫生问题。不同种类的布鲁氏菌大多还具有交叉感染的能力。布鲁氏菌可通过呼吸道、消化系统、皮肤粘膜等多种途径侵入人体，家畜作为人类感染布鲁氏菌最主要的感染源，人类通过接触带菌的羊、牛、猪等牲畜，进食布鲁氏菌污染的奶及奶制品、肉及肉制品等，均可引起发病。

现有的针对人兽共患病病原菌的检测方法主要包括分离培养鉴定法、免疫学方法和分子生物学方法。由于待测样品基质复杂，往往是多种病原菌共同存在，且含量相对较低，在进行常规检测之前往往需要通过前增菌培养，不仅对操作人员带来潜在感染的威胁，同时检测时间较长，会延误疫情的控制。免疫磁分离技术是利用磁性微球与特异性生物大分子结合形成的免疫磁珠，其可以从待测样品中快速捕获目标病原菌，并借助外加磁场将其分离出来，一定程度上可以缩短前增菌培养时间，甚至取代前增菌培养，缩短样品的检测时间，提高检测效率。量子点荧光探针标记技术是将量子点通过共价结合或者物理吸附的方式与蛋白质多肽、核酸等生物大分子结合，利用量子点独特的光学性能对研究对象进行定性或者定量分析的技术。与传统的荧光染料相比，量子点具有激发光谱宽、发射光谱窄、量子产率高、荧光稳定性好的优点，还可实现一元激发多元发射的同时标记，在基础生物学研究、医学诊断和卫生检测研究领域具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的为解决针对现有人兽共患病病原菌检测方法存在的问题，而提供了多种人兽共患病病原菌的同步快速检测试剂盒。

多种人兽共患病病原菌的同步快速检测试剂盒，它包括：免疫磁珠、量子点荧光生物探针；所述的免疫磁珠是羧基化磁珠用EDC和NHS活化后，与三价卵黄抗体IgY偶联；所述的量子点荧光生物探针是不同颜色的荧光量子点，分别与不同的兔多克隆抗体偶联；

所述的兔多克隆抗体为抗大肠杆菌 O157:H7兔多克隆抗体、抗单增李斯特菌兔多克隆抗体和/或抗布鲁氏菌兔多克隆抗体；

所述的三价卵黄抗体IgY是将大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和布鲁氏菌灭活后，免疫SPF鸡获得的；