[发明专利]一种增强HIV‑1核酸疫苗免疫原性的佐剂

说明书

技术领域

本发明属于免疫领域，具体涉及一种增强HIV-1核酸疫苗免疫原性的佐剂。

背景技术

DNA疫苗具有制作简单、经济、易于储存运输等优点，使其在细菌、病毒、寄生虫等多种疾病的防治与治疗中有很大的潜在应用价值，可能对人类疾病的防治以及畜牧业的健康发展起到划时代的作用。美国FAD已批准乙肝疫苗等几十余种DNA疫苗进入临床试验，显示出DNA疫苗的巨大潜力和应用前景。而由于DNA疫苗的免疫源性较弱的缘故，往往要与佐剂共同使用来增强其作用效果。

艾滋病(AIDS)是由艾滋病病毒(HIV)进入机体后，破坏机体的免疫细胞，最终导致机体的免疫能力完全消失，从而引发各类疾病的一种严重传染性疾病。编码HIV逆转录病毒蛋白的基因主要有三种：Env、Pol、Gag。Pol和Gag主要编码病毒的核内蛋白和逆转录酶蛋白，而Env基因主要编码其病毒膜表面的蛋白，并且中和抗体的表位基本都在Env基因上。目前尚无有效的疫苗和药物用于预防和清除感染的HIV病毒。DNA疫苗作为新兴的疫苗，有着传统疫苗无法代替等诸多优点，国内外也将DNA疫苗看作攻克艾滋病的关键技术之一，但目前制约DNA疫苗发展的最大问题是免疫原性不强，因此找到有效的佐剂来增强DNA疫苗的效果迫在眉睫。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的缺陷，提供一种酶解多肽作为佐剂来增强HIV DNA疫苗的免疫原性，增强HIV DNA疫苗的体内免疫应答效率。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种酶解多肽，通过如下方法制备而成：以羊骨为酶解反应的底物，用胰蛋白酶酶解，用超滤膜截留分子量5000-3000u的组分，冷冻干燥。

优选地，酶解条件为pH值7.8-8.2，酶解温度46-50℃，酶解时间3-5小时。

优选地，所述酶解多肽通过如下方法制备而成：将新鲜羊骨用清水洗净，经0.08-0.12MPa高压蒸煮0.5-1.5h使其软化，破碎成1-3cm³的骨粒，置于蒸馏水中，加入胰蛋白酶酶解；酶解结束后，加热使胰蛋白酶灭活，冷却至常温，12000-14000转/分钟离心15-25分钟，取上清，依次用截留分子量为10000u、5000u、3000u的超滤膜进行分级分离，收集截留分子量5000-3000u的组分，冷冻干燥。

优选地，胰蛋白酶添加量为底物重量的0.3-0.5％。

优选地，酶解条件为pH值8.0，酶解温度48℃，酶解时间4小时。

优选地，加热使胰蛋白酶灭活的方法为：在80-90℃条件下水浴8-12分钟。

优选地，经0.1MPa高压蒸煮1h使其软化。

上述酶解多肽用于HIV-1核酸疫苗佐剂的用途。

本发明优点：

本发明酶解多肽可以显著增强HIV核酸疫苗的免疫原性，增强HIV核酸疫苗的体内免疫应答效率(包括体液免疫和细胞免疫)，有助于提高HIV核酸疫苗的免疫效果。

附图说明

图1为常规IgG ELISA分析HIV-1Env特异性体液免疫反应强度。

具体实施方式

为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。

实施例1：酶解多肽的制备

新鲜羊骨清水洗净后-20℃冷冻保存备用；超滤杯和超滤膜购于上海摩速科学器材有限公司；胰蛋白酶(＞2.5×10⁵U/g)，北京索莱宝科技有限公司。

酶解多肽通过如下方法制备而成：

将新鲜羊骨用清水洗净，经0.1MPa高压蒸煮1h使其软化，破碎成1-3cm³的骨粒，置于蒸馏水中，加入胰蛋白酶酶解(胰蛋白酶添加量为底物重量的0.4％)，酶解条件为pH值8.0，酶解温度48℃，酶解时间4小时；酶解结束后，在85℃条件下水浴10分钟使胰蛋白酶灭活，冷却至常温，13000转/分钟离心20分钟，取上清，依次用截留分子量为10000u、5000u、3000u的超滤膜进行分级分离，收集截留分子量5000-3000u的组分，冷冻干燥。

实施例2：酶解多肽的免疫增强作用

一、实验材料

酶解多肽按照实施例1方法制备。

6-8周龄SPF级雌性Balb/c小鼠，用于免疫评价。

二、实验方法

1、HIV-1质粒DNA的制备