[发明专利]一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法

权利要求书

1.一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)、建立实验性精索静脉曲张动物模型；

(2)、早期给予巴戟天粗多糖治疗，观察下丘脑Arc神经元形态变化及GnRH分布和含量变化，探讨巴戟天粗多糖通过修复GnRH神经元而恢复机体性相关激素内分泌的功能和机制；

(3)、结果表明：50mg/kg–100mg/kg巴戟天粗多糖能够有效修复实验性精索静脉曲张早期下丘脑GnRH合成和分泌能力。

2.根据权利要求1所述的一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法，其特征在于，所述的步骤(1)具体包括: (A)动物分组和给药方法；(B)巴戟天粗多糖的制备和纯化；(C)巴戟天多糖含量测定；(D)巴戟天粗多糖光谱分析；(E) Turner法制作实验性精索静脉曲张大鼠模型；(F)精索静脉曲张大鼠模型鉴定；(G)动物血清制备；(H)大鼠心脏灌注，取材和冰冻切片；(I)脑冰冻切片尼氏染色；(J)高尔基染色；(K)脑免疫组织荧光染色；(L) GnRH mRNA原位杂交实验；(M)免疫印迹实验；N统计学方法。

3.根据权利要求1所述的一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法，其特征在于所述的步骤(A)的具体方法为：70只雄性SD大鼠按体重，以随机数字法，随机分为7组，每组10只，分别为假手术组，实验性精索静脉曲张模型组，溶剂对照组，25mg/kg巴戟天粗多糖治疗组，50mg/kg巴戟天粗多糖治疗组(M50组)，100mg/kg巴戟天粗多糖治疗组(M100组)，200mg/kg巴戟天粗多糖治疗组(M200组)；除假手术组外，均进行实验性精索静脉曲张手术；术后动物单笼饲养休息3天；

于术后第4天，对实验动物给予巴戟天粗多糖药液治疗；假手术组和曲张组动物不给药；溶剂对照组动物给予双蒸水，1.5ml/天；余巴戟天粗多糖治疗组给予相应药量的巴戟天多糖药液(100mg/ml)，不足2ml的，以双蒸水补足至1.5ml；持续治疗4周，即28天。

4.根据权利要求1所述的一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法，其特征在于，所述的步骤B的具体方法为(1)巴戟天干燥根剪断，粉碎，45℃烘干24h；

(2)加入3倍量95%乙醇，煮沸2h，弃上清；重复一次；

(3)自然挥发干燥，用6倍量双蒸水，煮沸2h，收集药液(上清)；重复两次；

(4)药液冷却至室温，以6层纱布过滤后，65℃旋转蒸发，得相对密度1.2g/ml的流浸膏；

(5)加入无水乙醇，使醇含量达到60%，4℃静置24h，收集沉淀；

(6)脱蛋白：沉淀以双蒸水溶解，取1/3体积Sevage试剂(氯仿：正丁醇=4:1)，二者混合加入分液漏斗，颠倒混匀5-8次，静置分层1h；去除下层的氯仿液和中层变性蛋白；重复此步骤4次；

(7)向已脱蛋白的粗多糖液中加入无水乙醇，使醇含量达到60%，4℃静置24h，收集沉淀；

(8)沉淀以无水乙醇，丙酮，乙醚分别洗涤一次，抽滤干燥，60℃干燥24h后，得巴戟天粗多糖粉末。

5.根据权利要求1所述的一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法，其特征在于，所述的步骤(E)的具体方法为：SD大鼠给予3.3ml/kg体重的7%水合氯醛腹腔注射，约5min后，大鼠处于深麻状态；将动物保定于手术台，腹部备皮，碘伏消毒一次，75%酒精消毒3次；铺无菌手术巾，暴露术区;于剑突下一横指，沿腹白线纵行切开皮肤约3cm，而后切开腹白线，钝性分离腹膜，进入腹腔；用浸过温生理盐水的纱布将左侧肠管拨至右侧，暴露腹后壁筋膜；钝性分离腹后膜，暴露下腔静脉，主动脉，肾蒂，肾上腺上静脉，精索内静脉；于肾静脉汇入下腔静脉处，放置一与肾静脉走行方向一致的探针；探针直径0.8mm；以眼科弯镊将4号手术线绕到肾静脉后方，将肾静脉和探针一起结扎；注意结扎点需紧靠肾静脉汇入下腔静脉处，结扎点需位于精索内静脉汇入肾静脉之后；缓缓抽出探针，见肾静脉远端因血压增高而扩张；观察无活动性出血，将肠管复位，用3号手术缝线3层缝合腹前壁；术后动物单只单笼饲养三天。

6.根据权利要求1所述的一种巴戟天多糖提取物通过刺激GnRH释放有效恢复精索静脉曲张血清性激素水平的方法，其特征在于，所述的步骤(F)的具体方法为：SD大鼠给予3.3ml/kg体重的7%水合氯醛腹腔注射，约5min后，大鼠处于深麻状态；将动物保定于手术台，腹部备皮，碘伏消毒一次，75%酒精消毒3次；于剑突下一横指（约1.5cm），沿腹白线纵行切开皮肤约5cm，而后切开腹白线，钝性分离腹膜，进入腹腔；用浸过温生理盐水的纱布将肠管拨至腹腔外，钝性分离腹后膜，暴露下腔静脉，主动脉，双侧肾，肾蒂，精索内静脉；观察左右侧肾形态，大小；观察左侧精索内静脉是否存在迂曲和曲张；用游标卡尺测量左右侧精索内静脉管径；以左侧肾无萎缩，左侧精索内静脉管径大于右侧3倍视为建模成功。