[发明专利]一种用于检测粪肠球菌庆大霉素耐药基因的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种采用分子生物学手段检测微生物耐药基因的方法，具体为一种用于检测粪肠球菌庆大霉素耐药基因的分子标记及其应用。

背景技术

肠球菌是一种重要的机会致病菌，在自然界中广泛分布，常栖居于人和动物的肠道中，肠球菌可导致人和动物多个脏器的感染，包括尿路感染、皮肤软组织感染、盆腔感染、腹腔感染、伤口感染、菌血症、心内膜炎和脑膜炎。肠球菌由于其细胞壁坚厚，对许多抗生素表现为固有耐药，如对β-内酰胺抗生素、氨基糖苷、氯林可霉素、氯化喹啉酮和甲氧苄氨嘧啶磺胺。由于质粒、转座子和突变株的发生，肠球菌易被诱导产生新的耐药性，对许多抗生素可产生获得性耐药，如对高水平的β-内酰胺、氨基糖苷、糖肽类、四环素、红霉素、氟化喹啉酮、利福平和氯霉素容易产生获得性耐药。近30年来，由于畜牧业将抗菌药物作为抗菌生长促进剂添加在饲料中，以增加饲料的利用率和加快动物生长，动物体内的肠球菌在抗菌药物的选择性压力作用下产生了各种耐药菌，甚至出现了多重耐药菌株。肠球菌耐药菌株的增多给临床治疗带来了较大困难。据美国波士顿哈佛大学医学院在2004年的报道，院内获得性粪肠球菌是手术后感染的主要原因，其每年可浪费数十亿美元的医疗费用。

为查明动物源性粪肠球菌的耐药现状，以阻断耐药基因在不同菌株间的传播，以从动物源性食品的角度去控制耐药性的传播，现有技术中采用药敏纸片法、浓度稀释法和VITEK-AMS全自动药敏法，检测了临床分离的不同动物源粪肠球菌对多种抗菌药物的耐药表型；并通过采用PCR检测不同耐药基因与耐药表型之间的关系。

但是上述现有技术从耐药表型着手，再对其是否携带耐药基因进行分析，该方法的使用范围具有局限性，不适合广泛检测病原菌的耐药基因。

发明内容

本发明的目的是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种能够准确鉴定菌株耐药基因，且适用于推广应用，对于科学制定抗菌感染的防治方案及细菌耐药性的检测提供必要理论依据，本发明提供了一种用于检测粪肠球菌庆大霉素耐药基因的分子标记及其应用。

技术方案：一种用于检测粪肠球菌庆大霉素耐药基因的分子标记，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。

优选的，所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5，端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。

表1分子标记序列