[发明专利]一种适用于艰难梭菌的培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于艰难梭菌的培养基及其制备方法，属于微生物培养技术领域。

背景技术

艰难梭菌(Clostridium difficile)是梭菌属的一种专性厌氧菌，对氧十分敏感，很难分离培养，故得名。发现于1935年，但直到1977年发现本菌与临床长期使用某些抗生素(氨苄青霉素、头孢霉素、红霉素、氯林可霉素等)引起的伪膜性肠炎有关，方被重视。艰难梭菌广泛分布于自然生境中，如土壤、干草、沙、一些大型动物(牛、驴和马)的粪便，及狗、猫、啮齿动物和人的粪便，除此之外还大量存在于水和动物的肠道中婴儿的粪便中常含有艰难梭菌，为新生儿肠道中正常菌群，大约50％的12月龄婴儿的肠道中有艰难梭菌，2岁以上儿童的带菌率大约为3％，但此菌在健康成人中出现频率较低，无症状带菌的成人在瑞典是1.9％，在日本为15.4％。

艰难梭菌可以引发下列疾病：1.伪膜性肠炎(pseudomenbranous colitis，PMC)：临床表现为腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状，症状突然开始，并伴随血压低，严重时能致死。通常还伴有发烧，白细胞增多，之后可导致死亡，是很严重的一类疾病。2.抗生素相关性腹泻(antibiotic-associated diarrhoea)：在体内的潜伏期为5-10天，之后导致大量的棕色或水状腹泻，持续1周左右。除上述疾病外，艰难梭菌尚可引起肾盂肾炎、脑膜炎、腹腔及阴道感染、菌血症和气性坏疽等。近年来该菌已成为医院内感染的病原菌之一，日益被人们所重视。如何选择合适的培养基培养该菌株对于研究其生物学特性以及对于探寻其引发的感染的治疗具有重要的意义。

现有技术显示，本菌为严格的专性厌氧菌，用常规的厌氧培养法不易生长。生长温度为25℃～45℃，而最适温度为30℃～37℃。在血琼脂、牛心脑浸液琼脂及CCFA等平板，经48小时培养后，菌落的直径3～5mm，圆形，略凸起，白色或淡黄色、不透明、边缘不整齐、表面粗糙。在血平板上不溶血，在卵黄琼脂平板上不形成乳浊环。CCFA平板上生长的菌落在紫外线照射下可见黄绿色荧光。本菌经肉汤培养2天以上，菌体有溶融现象。

发明内容

本发明目的在于提供一种适用于艰难梭菌的培养基及其制备方法，其对于研究其生物学特性以及对于探寻其引发的感染的治疗具有重要的意义。

本发明通过下述技术方案实现上述技术效果：

一种适用于艰难梭菌的培养基，其由如下重量份的组分制备得到：蛋白胨10-15份，脱水小牛脑浸粉6-8份，脱水牛心浸粉10-15份，葡萄糖1.0-1.5份，硫酸镁0.1-0.5份，昆布氨酸1.5-2.5份，纳他霉素0.01-0.03份，磷酸二氢钠0.5-0.9份，甘氨酸0.5-0.9份，维生素B10.3-0.5份，纯化水800-1000份，pH调整为7.2-7.4。

作为本发明所优选的一种实施方式，所述的培养基如下重量份的组分制备得到：蛋白胨12.5份，脱水小牛脑浸粉7份，脱水牛心浸粉12.5份，葡萄糖1.25份，硫酸镁0.3份，昆布氨酸2份，纳他霉素0.02份，磷酸二氢钠0.7份，甘氨酸0.7份，维生素B10.4份，纯化水900份，pH调整为7.3。

本发明上述培养基的制备方法为：量取处方量二分之一量的纯化水，向其中加入蛋白胨、脱水小牛脑浸粉、脱水牛心浸粉以及葡萄糖，搅拌使其溶解，加入余量纯化水，向其中加入硫酸镁和磷酸二氢钠，调节其pH至7.2-7.4，121℃灭菌20min，培养基冷却至室温后向其中甘氨酸、昆布氨酸以及维生素，即得适用于艰难梭菌的培养基。

本发明上述培养基可以作为艰难梭菌的培养基可以用于其菌株的保藏，活化以及分离。用于保藏时，其培养基中还包括1.5％-2％的琼脂，琼脂的添加时间在灭菌之前添加。

本发明与现有技术相比有益效果在于：

本发明克服了现有技术中艰难梭菌难以培养的技术不足，所述的培养基非常适合艰难梭菌的生长，适合作为保藏培养基或者用于优势菌株筛选中。这对于研究艰难梭菌的生物学特性以及对于探寻其引发的感染的治疗具有重要的意义。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，但所述实施例并不以任何方式限定本发明专利保护的范围。

实施例1本发明适用于艰难梭菌的培养基