[发明专利]改性壳聚糖在CIK细胞培养方面的应用及制备商品化培养基、培养器皿的用途

说明书

本发明公开了改性壳聚糖在CIK细胞培养方面的应用及制备商品化培养基、培养器皿的用途，改性壳聚糖由如下方法制备而成：先将离子液体用水溶解制成8‑12mmol/L的离子液体水溶液，然后向该离子液体水溶液中添加壳聚糖，至完全溶解混合均匀，壳聚糖浓度为30‑50g/L，再将该溶液于搅拌条件下辐照反应，辐照剂量为40‑60kGy，最后用乙醇沉淀洗涤、抽滤，收集滤饼，滤饼干燥研磨即得。实验证明，本发明提供的改性壳聚糖可以提高CIK细胞的扩增活力和杀瘤活性，可以用于降低细胞治疗成本并提升治疗效果，用于制备商品化培养基、培养器皿，市场前景广阔。

技术领域

本发明属于细胞免疫领域，涉及CIK细胞，具体涉及改性壳聚糖在CIK细胞培养方面的应用及制备商品化培养基、培养器皿的用途。

背景技术

壳聚糖(chitosan)又称脱乙酰甲壳素，是由自然界广泛存在的几丁质(chitin)经过脱乙酰作用得到的，化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖。自1859年，法国人Rouget首先得到壳聚糖后，这种天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等优良性能被各行各业广泛关注，在医药、食品、化工、化妆品、水处理、金属提取及回收、生化和生物医学工程等诸多领域的应用研究取得了重大进展。针对患者，壳聚糖降血脂、降血糖的作用已有研究报告。

生物治疗是继手术、化疗及放疗3种传统模式之后的第4大肿瘤治疗模式，前3种模式或毒副作用较大，或不能清除体内残存肿瘤细胞，大部分肿瘤患者终因复发或难治而导致死亡。细胞免疫治疗技术在肿瘤的生物治疗中占有重要地位,显示出良好的应用前景，并逐渐成为肿瘤治疗的重要手段之一。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercell，CIK)是近年来发现的一种非常有前景的过继免疫细胞，具有增殖迅速、杀瘤活性广谱且高效、毒副作用微小等优点，已经成为肿瘤生物免疫治疗的主力军。CIK细胞的主要效应细胞为CD3+CD56+表型T淋巴细胞，兼有NK细胞和T细胞的特征。在功能上，CIK一方面拥有T淋巴细胞强大抗肿瘤活性，另一方面拥有NK细胞非MHC限制性的杀伤肿瘤的特点，其增殖迅速、对正常造血影响轻微。CIK细胞的扩增活力和杀瘤活性直接关系到治疗成本和效果。

目前尚未见壳聚糖及其衍生产品在CIK细胞培养扩增方面的应用。

发明内容

本发明旨在提供一种改性壳聚糖，以及该改性壳聚糖在CIK细胞培养方面的应用及制备商品化培养基、培养器皿的用途，该改性壳聚糖可以提高CIK细胞的扩增活力和杀瘤活性，降低细胞治疗成本并提升治疗效果。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种离子液体辐照改性壳聚糖，由如下方法制备而成：用离子液体对壳聚糖辐照改性，所述离子液体的阳离子的化学结构式如下：

其中，R为己基或辛基。

优选地，所述离子液体的阴离子为溴离子或氯离子，离子液体的化学结构式如下：

优选地，所述改性壳聚糖由如下方法制备而成：先将离子液体用水溶解制成8-12mmol/L的离子液体水溶液，然后向该离子液体水溶液中添加壳聚糖，至完全溶解混合均匀，壳聚糖浓度为30-50g/L，再将该溶液于搅拌条件下辐照反应，辐照剂量为40-60kGy，最后用乙醇沉淀洗涤、抽滤，收集滤饼，滤饼干燥研磨即得。

上述改性壳聚糖在CIK细胞培养方面的应用。

一种用于CIK细胞培养的培养基，含有有效浓度的上述改性壳聚糖。

一种用于CIK细胞培养的培养器皿，培养器皿内壁包被有有效厚度的包被层，包被层的材料为上述改性壳聚糖。

优选地，该培养器皿内部用氩气填充密封。

本发明优点：