[发明专利]一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法

说明书

本发明属于桑黄多糖的提纯技术领域，提供了一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法。该方法通过将桑黄子实体冷冻研磨细化，在去离子水中分散溶胀，加入表面活性剂使得微细桑黄完全分散形成乳液，置于反应釜中。在保证乳液稳定性的前提下将其加热至一定温度，然后对乳液进行反复加压、真空，使得桑黄多糖高效溶出。然后通过加入盐使乳液破坏，离心收集上清液，得到桑黄多糖。与传统方法相比，该发明提取纯化效率高，对桑黄多糖的损伤小，较佳的保留了桑黄多糖的活性，得到的纯化桑黄多糖适合于肿瘤用药。

技术领域

本发明涉及桑黄多糖的提纯技术领域，尤其是涉及一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法。

背景技术

名贵中药桑黄的显著药效主要源于其中的活性多糖。桑黄多糖通常是从子实体、菌丝体及发酵液中分离得到，一般由10个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成，可通过控制细胞分裂及分化，调节细胞生长和衰老而起到活性作用。由于子实体的质地较硬，成分复杂，导致桑黄多糖的提取困难较大，通常的提取方法为水提取法，包括热水提取法、酶提取法、微波提取法、超声提取法等。稀酸提取法、稀碱提取法、盐提取法及其联合应用，也常用于桑黄多糖的提取。

近年来，许多学者对桑黄多糖的提取纯化方法进行研究，试图采用一些新方法，以提高多糖的提取效率，并提高其活性及药用价值。Ma等发明了低压低温提取高活性桑黄多糖的方法，通过液体发酵法获得桑黄菌丝体，与去离子水按比例混合均匀，在-0.04～-0.07MPa的压力，50～60℃的温度下提取1～3h，提取液经离心分离、醇沉，得到具有活性的桑黄多糖。该方法与热水浸提法和超声协助提取法相比，在提高桑黄多糖得率的同时，能很好的保持桑黄多糖的活性结构，获得高活性的桑黄多糖。Sun等采用超声萃取法从桑黄子实体中提取桑黄粗多糖，用高速逆流色谱法进一步纯化桑黄多糖，可提高桑黄粗多糖的得率，可达生药的6%。而且进一步纯化桑黄多糖后其纯度大幅提高，可达75%左右。Yang等采用桑黄子实体为原料，经粉碎，提取，沉淀等工艺分离得到的一种β葡甘聚糖ZDT，重均分子量在88～102万道尔顿之间，多糖质量百分含量超过90％。该提取工艺使用聚维酮K30代替乙醇，同样体积的提取液聚维酮K30用量只有乙醇的五十分之一，大大降低了生产成本，所得多糖ZDT具有显著的抗肿瘤活性。Zou等首先采用液体培养获得桑黄多糖发酵液，然后经纱布或板框滤布固液分离后，发酵滤液先采用无级陶瓷膜系统分离，获得桑黄多糖清液，再采用分子量为5000级的超滤有机膜系统纯化浓缩，得桑黄多糖浓缩液，浓缩液还可进一步采用冷冻干燥或喷雾干燥方法制备桑黄多糖干粉。整个过程不添加有机溶剂乙醇沉淀获得多糖，可快速分离浓缩，具有节能、无污染、降低成本、缩短时间等优点，可应用于工业生产。Wang等将桑黄栽培废料烘干并粉碎得到桑黄栽培废料干粉，与碱性乙醇溶液混合，然后超声处理20~40min，过滤得到滤液和滤渣。向滤渣中加入去离子水，混合均匀，调节pH值至4~6，加入纤维素酶和葡萄糖氧化酶组合而成的复合酶，在45~55℃下酶解，酶解液经离心处理分离得上清液和沉淀物。得到的滤液经旋转蒸发后除去乙醇，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，上层液经减压浓缩干燥得到桑黄黄酮。得到的上清液用旋转蒸发仪减压浓缩后进行醇沉，离心，得上清液和沉淀物，沉淀物即为桑黄多糖，由此可制得桑黄黄酮和桑黄多糖。

在上述已有的研究的基础上，本发明旨在进一步提高桑黄多糖的提纯效率，并保护好其结构，减少损伤，提高桑黄多糖的药用活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法，可以解决传统方法多糖分离纯化较为困难的缺陷，最主要的，创造性的应用反复加减压的方法进行提纯，可保证提纯过程在较低温度下进行，以减小桑黄多糖的损伤，保留其活性，同时桑黄多糖的溶出效率高，得率高。

本发明涉及的具体技术方案如下：