[发明专利]一种细胞周期阻滞剂KR在人乳腺癌细胞中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞分裂素kinetin riboside(KR)作为一种细胞周期阻滞剂对乳腺癌细胞株抗肿瘤作用，属于生物化学与分子生物学技术领域。

背景技术

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，据世界卫生组织国际癌症研究中心(International Agency for Research on Cancer,IARC)统计，2015年全球女性乳腺癌新发病例达155万左右，占全部女性恶性肿瘤发病的25％左右；因乳腺癌死亡占所有女性恶性肿瘤死亡的15％左右，占所有女性死亡的2％。与其他大多数国家一样，乳腺癌已成为了中国女性最常见的癌症，在上海等东部沿海城市，乳腺癌已超越肺癌成为女性发病率最高的癌症；目前每年中国乳腺癌新发数量和死亡数量分别占全世界的12.2％和9.6％。临床上用于治疗乳腺癌的常规药物虽然对治疗起到重要作用，但却存在着明显的毒副作用。经大量实践证明，运用现代技术，从天然产物中获得的天然活性物质的活性成分能治疗乳腺癌，同时减轻放化疗的毒副作用。因此，寻找有效提高治疗效率，毒副作用小的天然药物来治疗乳腺癌是十分必要的。

细胞分裂素CK(cytokinin)是二十世纪五十年代年被发现的一类植物激素，它在植物的生长发育中起决定性作用，如：促进细胞的分裂、组织分化、侧芽生长，抑制不定根、侧根形成，抑制衰老，调节植物的顶端优势，营养引号的传递等，天然存在的细胞分裂素是腺嘌呤的衍生物，是其嘌呤N6位置上的H被其它基团取代形成的。活性因侧链的长度、不饱和度和其它性质不同而有很大差异。细胞分裂素的存在形式包括：游离、核苷，核苷-5’磷酸、3-,7-,9-和O-糖苷和氨基结合物。常见的天然存在的细胞分裂素有：玉米素(Zeatin,ZT)、玉米素核苷(Zeatin riboside,ZR)、二氢玉米素(dihydrozeatin,dHZT)、异戊烯基腺苷(isopentenyl adenosine,i6A)。目前越来越多的研究发现，CK不仅调节植物的生长发育同时对动物细胞的增值和分化也起到很重要的影响。

KR(kinetin riboside)是一种存在于植物中的细胞分裂素CK的核苷形式，俗名为激动素核苷，分子式为C₁₅H₁₇N₅O₅,分子量为347.3。核苷类化合物的共同结构特点是由糖基和碱基构成，从化学结构上来看天然核苷与核苷类化合物存在不同程度的相似之处，从而猜测KR也可以干扰或者直接作用于蛋白质、核酸的生物合成，而干扰肿瘤细胞和病毒复制，在抗肿瘤和抗病毒方面发挥着重要的作用。据实验证实KR是一种能诱导某些细胞株凋亡的抗增殖剂，其原理是可以上调CDKN1A引起ATP耗竭，导致细胞周期阻滞在G2/M期。在体外对癌细胞具有很强的毒性和促凋亡作用。当用KR处理乳腺癌细胞后导致细胞周期不同程度的受阻和(或者)凋亡。

发明内容

本发明针对上述现有技术，本发明提供了KR在人乳腺癌细胞株中抗肿瘤的应用。

本发明的技术方案：

一种细胞周期阻滞剂KR在人乳腺癌细胞中的应用，步骤如下：

(1)细胞复苏：将装有冻存人乳腺癌细胞株MCF7的冻存管从-80℃冰箱中取出，迅速放入37℃水浴锅中，轻微摇动，待液体融化；将冻存管中的人乳腺癌细胞株MCF7悬浮于含有10％灭活胎牛血清的无菌RPMI 1640培养液的离心管中，1000rpm，5min离心，离心结束后，弃上清，轻轻弹起细胞，再次入无菌RPMI 1640培养液与离心管中，把细胞悬浮起来，转移到培养瓶中左右轻轻摇动，使培养瓶中的细胞均匀分布，得到复苏的乳腺癌细胞株MCF7；

(2)细胞培养：将复苏的人乳腺癌细胞株MCF7置于浓度为5％CO₂、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养，10h后观察细胞，若已贴壁，将培养液全部吸出，再次加入等量的RPMI 1640培养液；待细胞长至培养瓶底面积的70％～80％传代1次；

(3)药物配制：用无菌的不含血清的RPMI 1640培养基溶解KR粉末，使KR溶液的母液浓度达到1.2mM，继续用无菌RPMI 1640培养基将溶解好的KR溶液的母液稀释至浓度为2μM-200μM，过滤除菌，室温保存；