[发明专利]一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法及应用

说明书

本发明公开了一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法及应用。本发明从快速生长发育的鸡胚中分离提取表皮生长因子EGF，方法是根据调节匀浆液的pH值使EGF带阳电荷，利用不溶于水的苯甲酸吸附EGF，使其从匀浆液中分离出来，再利用丙酮不溶解EGF的性质，将EGF从苯甲酸上解析出来的原理设计，制备出一种含鸡源EGF的促进动物肠黏膜修复的营养修复剂。本发明的动物肠黏膜EGF营养修复剂，每吨畜禽全价饲料中添加0.05‑0.3公斤，可显著改善动物肠黏膜结构功能，提高畜禽采食量和生长性能，显著降低断奶仔猪腹泻率。

技术领域

本发明涉及一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法及应用。

背景技术

动物肠道不仅是营养物质消化吸收的场所，也是重要的免疫器官，维护正常的肠道机能对动物生长发育至关重要。动物在营养素缺乏、感染、应激及病理等情况下，均可导致肠道结构和功能损伤、细菌和内毒素移位以及肠道黏膜屏障功能障碍等，严重影响动物健康和生产性能，给养殖生产带来重大的经济损失。表皮生长因子(epidermal growthfactor，EGF)属于促生长因子家族成员，具有广泛的生物活性，具有促进胃肠组织生长和发育、修复受损的黏膜组织、调节肠道各种酶活性、提高营养物质消化吸收等重要作用。外源供给EGF是改善动物肠道结构和功能、修复损伤肠道、促进动物健康生长的重要途径，EGF作为新型动物肠黏膜营养调控剂在畜牧业生产上有十分广阔的应用前景。

EGF是一条由53个氨基酸组成的单链多肽，二级结构为致密的球状结构，特殊空间结构使EGF具有较高稳定性，对酸、热具有耐受性，能抵抗胰蛋白酶、胃蛋白酶和糜蛋白酶的消化。EGF具有许多生物学作用，可促进细胞内DNA、RNA和蛋白质合成；刺激多种组织细胞分裂、增殖和分化；抑制胃酸分泌，促进溃疡愈合及上皮组织再生；增加体内物质转运和代谢；促进细胞外基质以及机体一些物质(果酸、前列腺素)合成，具有调节精子、卵巢发育和生殖功能的作用，EGF是促进新生动物胃、肠道发育的重要生长因子，但是EGF有限的来源、昂贵的价格制约着其在畜牧领域的广泛应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法，其特征在于其步骤如下：

1)取15-20日龄孵化鸡胚，去壳，添加0.05mol/L乙酸溶液高速匀浆10-30分钟，1500转/分钟，其中去壳鸡胚与乙酸溶液质量比为1：5-10，离心20-30分钟，取上清液；

2)沉淀继续加0.05mol/L乙酸溶液匀浆，1500转/分钟离心，其中沉淀与乙酸溶液质量比为1：5-10，离心20-30分钟，合并两次上清液，去除上清液表面脂肪，

3)上清液加苯甲酸钠，充分搅拌，使其全部溶解，用3mol/L的NH₄OH溶液调pH至5.5-6.5，搅拌半小时，静置，经减压过滤，取出沉淀；

4)待沉淀干燥后，加预冷丙酮，搅拌形成悬浊液，4℃下静置4-12h，则有蛋白样絮状沉淀，减压过滤；将沉淀再用丙酮洗涤，加入沸石粉，洗涤后沉淀与沸石粉的质量比为1：5-10，搅拌混合10-20分钟，50℃干燥粉碎即制成动物肠黏膜EGF营养修复剂。

优选的，所述的鸡胚是指15-20日龄的健康发育的白羽AA鸡或三黄鸡鸡胚。

本发明所述的EGF为一条由53个氨基酸组成的单链多肽，二级结构为致密的球状结构。

优选的，所述的步骤1)和步骤2)中的乙酸溶液的浓度为0.05mol/L，温度为4℃。

优选的，所述的苯甲酸钠加入量为每升上清液加入20-30g。

优选的，所述步骤4)中加入预冷丙酮后，沉淀在预冷丙酮溶液中的质量浓度为0.04-0.1g/ml，预冷丙酮温度为4℃。