[发明专利]干细胞培养基及干细胞分离方法

说明书

本发明属于干细胞培养领域，尤其涉及细胞培养基及干细胞培养方法。本发明提供了一种干细胞培养基，包括基础培养基、血小板裂解物、L‑谷氨酰胺和丝裂霉素c。本发明还提供了一种干细胞分离方法，包括以下步骤：所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织，继续培养，待培养瓶中干细胞融合度达80％～90％时，消化后传代培养。本发明所公开的干细胞培养基能避免现有干细胞培养基大多含有动物血清而引入外源病毒的风险，所公开的干细胞分离方法操作简单。

技术领域

本发明属于干细胞培养领域，尤其涉及干细胞培养基及干细胞培养方法。

背景技术

干细胞(StemCell)是一种具有自我更新能力以及多向分化潜能的细胞。按照分化潜能，干细胞可分为三大类：全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞。按照发育阶段，干细胞又可以分为：胚胎干细胞与成体干细胞。由于伦理学的限制，现在用于临床研究和应用的干细胞多为成体干细胞。成体干细胞来源于成年动物的许多组织和器官，包括造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带干细胞、脐血干细胞等等。

脂肪干细胞即脂肪来源干细胞或脂肪来源间充质干细胞 (adipose-derivedstem cells，ADSCs)，由于脂肪干细胞具有促进伤口愈合、损伤组织细胞再生和减少疤痕的能力及抗衰老能力，脂肪干细胞一经发现，就在以修复重建为主旨的整形外科及以年轻化为核心的美容医学领域引起轰动。随着国内消费水平的不断提高，新一代的微整形、抗衰老为主流的美容市场获得了突破性的机遇。其中脂肪干细胞产品以其独特的优势尤为引人注目。

脂肪干细胞具有来源丰富，取材方便的特点。一方面，脂肪组织在体内分布广泛，储量丰富；另一方面，吸脂术是整形外科成熟的常规手术，手术风险小，其作为常规“废弃的副产品”获取容易。对患者来说，吸脂雕塑体形的同时享受干细胞的年轻化神奇功效是一次双赢的生命重塑，痛苦与恐惧感少于骨髓提取，亦无血源污染与免疫排斥风险，由此形成临床应用的优势。

目前，脂肪干细胞的分离方法多为胶原酶消化法，导致细胞得率低，消化时间不好把握，容易影响细胞的活性。而且培养体系多采用含血清培养法，由于血清含有其它动物源成分，使培养体系存在引入外源性病毒的风险，从而使脂肪干细胞在临床应用中存在很大瓶颈。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种干细胞培养基及干细胞分离方法，能避免现有干细胞培养基大多含有血清而引入外源病毒的风险，而且公开的干细胞分离方法无需胶原酶消化法分离，能提高干细胞分离效率。

本发明提供了一种干细胞培养基，包括基础培养基、血小板裂解物、L- 谷氨酰胺和丝裂霉素c。

作为优选，所述血小板裂解物在所述干细胞培养基的体积百分比为5％。

作为优选，所述L-谷氨酰胺在所述干细胞培养基的浓度为4mmol/L。

作为优选，所述丝裂霉素c在所述干细胞培养基的浓度为50ng/ml。

本发明还提供了一种干细胞分离方法，包括以下步骤：

获取离体组织，所述离体组织与干细胞培养基混合置于培养瓶中培养至所述离体组织中的细胞从所述组织中爬出来后刮除所述离体组织；继续培养，待培养基中细胞融合度达80％～90％时，消化后传代培养。

作为优选，所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第9天刮除离体组织。

其中，所述分离方法中的干细胞培养基为本发明提供的干细胞培养基。

其中，所述离体组织与干细胞培养基混合置于培养瓶中培养至所述离体组织中的细胞从所述组织中爬出来时，这时所述离体组织与干细胞培养基混合培养的时间为第9天。