[发明专利]一种敲除c-di-AMP分解酶的重组耻垢分枝杆菌株及其应用

说明书

本发明涉及一种敲除c‑di‑AMP分解酶的重组耻垢分枝杆菌株。将耻垢分枝杆菌c‑di‑AMP降解酶基因MSMEG_2630的上下游同源臂分别连入pMSG360载体，重组质粒转化含有重组酶gp60和gp61pJV53质粒的耻垢分枝杆菌感受态细胞，筛选并获得一株敲除c‑di‑AMP分解酶的重组耻垢分枝杆菌株(rMS‑ΔCnpB)，其保藏编号为：CCTCC M 2016336。rMS‑ΔCnpB菌株免疫小鼠，可调节小鼠体液和细胞免疫应答，尤其是感染结核分枝杆菌后的Th1型细胞免疫应答，并提高机体抗分枝杆菌感染的保护力，因而可用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂的研制，具有比较好的应用前景。

技术领域

本发明属于结核病疫苗及免疫治疗领域。本发明涉及一种敲除c-di-AMP分解酶的重组耻垢分枝杆菌株。本发明还涉及上述重组耻垢分枝杆菌株用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂中的应用。

背景技术

结核病流行现状

结核病(Tuberculosis，TB)是全球范围内严重危害人类健康的慢性传染病。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)是TB的病原体，据WHO报告，2015年，全球估计新发病例1 040万，新发病例中有120万(11％)HIV患者，共计140万人死于TB。TB在死亡原因中仍排在前十位。印度、印度尼西亚、中国、尼日利亚、巴基斯坦和南非这六个国家占了新发病例总数的60％。积极的TB防治研究及措施在2000年至2015年避免了4900万TB死亡，但目前TB流行态势和危害程度表明，在TB预防、诊断和治疗方面的缺口还很大。

结核病防治现状

卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin vaccine，BCG)是目前用于结核病预防的唯一疫苗。BCG主要作为Mtb感染前的预防性疫苗，并针对Mtb的早期感染，不能预防和控制潜伏感染状态Mtb的复发，但其存在着保护期短、保护性免疫应答不强等缺点，并且作为一种减毒活疫苗，不能用于免疫低下人群的接种，因此研制开发安全、可靠的新型TB疫苗迫在眉睫。

在TB的治疗方面，由于TB化疗疗程长达6个月以上，导致患者不能坚持服药和依从性差，并往往引起耐药，特别是出现广泛结核耐药和超级耐药结核菌。随着对Mtb本质认识的逐步深入，已证实TB患者Th1型细胞免疫反应较低，因此可提高机体免疫功能、尤其是Th1型反应的治疗性疫苗具有较好的应用前景。该类疫苗主要用于己感染Mtb无症状携带者或是己发病的患者，选择性地诱导人体的特异性和非特异性免疫应答，最终达到治疗的目的(MI,et al.Therapeutic vaccines for tuberculosis--a systematicreview.Vaccine.2014,32(26):3162-8)。目前正在开发的TB新型疫苗主要包括亚单位疫苗、基因疫苗、重组BCG疫苗、减毒或增强的全菌体活疫苗、营养缺陷型活疫苗、结合DC的疫苗等，但目前还没有一种新型疫苗可以替代传统的BCG或用于TB的免疫治疗。

重组分枝杆菌疫苗的研究

将外源性基因导入分枝杆菌构建成重组活疫苗是该领域研究重要方向之一。BCG是研究较多的分枝杆菌活疫苗载体，但存在生长缓慢、转化效率低、遗传操作复杂等问题，且BCG本身为减毒株，不能用于免疫低下人群接种。