[发明专利]一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法

权利要求书

1.一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法，其特征在于：采用复合酶提取的方法显著提高铁皮石斛多糖的转移率，具体包括以下步骤：

(1) 将干燥的铁皮石斛粉碎后过40～100目筛，得到铁皮石斛粉末；

(2) 称取铁皮石斛粉末，加入15～30倍重量的纯化水，搅拌均匀，然后升温至40～60℃；

(3) 向上述提取体系中分别加入木瓜蛋白酶、中温α-淀粉酶，搅拌均匀，继续在40～60℃下酶解2～5h；

(4) 将上述提取体系加热升温至90～100℃，并保温5～15min，使加入的酶制剂变性失活；

(5) 待温度降至室温，2000～5000rpm 离心10～20min，上清液即为铁皮石斛石斛多糖提取液；

(6) 上述铁皮石斛多糖提取液过阴离子交换树脂柱进行脱色；

(7) 脱色后的铁皮石斛多糖提取液减压浓缩至每1mL相当于含生药0.1～1.0g的浓缩液；

(8) 向上述浓缩液中加入95% 乙醇或无水乙醇，使乙醇浓度达到80%，在温度2～5℃下醇沉过夜；

(9) 将上述乙醇沉淀液进行离心，沉淀物用80%乙醇洗涤3次，冷冻干燥至含水量小于5%，得到铁皮石斛多糖；

(10) 采用苯酚-硫酸法测定上述方法所得多糖的转移率，考马斯亮蓝法测定多糖中蛋白质的含量，双波长比色法测定淀粉含量，发现上述方法所得多糖转移率达87%以上，蛋白含量小于2%，未检出淀粉。

2. 如权利要求1 所述的一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法，其特征是：步骤(3)木瓜蛋白酶的添加量为10～50U/g，中温α-淀粉酶的添加量为50～200U/g。

3.如权利要求1 所述的一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法，其特征是：步骤(3)中酶解温度为50℃，酶解时间为酶解3h。

4.如权利要求1 所述的一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法，其特征是：步骤(6)所述阴离子交换树脂为D941或D900大孔树脂。

5.如权利要求1 所述的一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法，其特征是：步骤(6)阴离子交换柱径高比为1:4～1:8，上样量为8个柱床体积，上样流速为2～5mL/min，上样完毕以1个柱床体积的纯化水洗脱，合并过柱液及洗脱液。

6.如权利要求1 所述的一种酶法提取铁皮石斛多糖的方法，其特征是：步骤(7)浓缩到每1mL含生药0.2g。