[发明专利]一种透性化细胞制备茶氨酸的方法在审
| 申请号： | 201710445408.3 | 申请日： | 2017-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN107164418A | 公开（公告）日： | 2017-09-15 |
| 发明（设计）人： | 帅玉英;夏道宗;华颖 | 申请（专利权）人： | 浙江中医药大学 |
| 主分类号： | C12P13/04 | 分类号： | C12P13/04;C12N1/20;C12N11/10;C12N11/04;C12R1/38 |
| 代理公司： | 南通市永通专利事务所32100 | 代理人： | 葛雷 |
| 地址： | 310053 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 透性化 细胞 制备 氨酸 方法 | ||
1.一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：
（1）制备透性化细胞：
首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；
用pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；
（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸：
将步骤（1）得到的透性化细胞置于含0. 2～0. 4M谷氨酰胺和1.5～ 2.5M乙胺盐酸盐的pH 为9～10的50～100mM硼酸缓冲液中，在35～40℃下进行2～8小时的酶反应，制备得到茶氨酸。
2. 根据权利要求1所述的一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：将菌体加入到处理试剂中进行处理，是将菌体加入50%的乙醇中，25℃下震荡处理1min；或是将菌体重新置于pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液中，50℃加热10min，冷却。
3. 根据权利要求1或2所述的一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：步骤（1）中将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养的具体方法是：在发酵培养基中，以g/L计：葡萄糖12、酵母抽提物0.9、谷氨酸钠12、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO40.6、KH2PO40.6、EDTA-Fe 0.1，pH 6.8-7.0，35-37℃，200 rpm的条件下培养可产谷氨酰胺酶的硝基还原假单胞菌16 h。
4.一种透性化细胞在制备固定化细胞中的应用，其特征是：将透性化细胞加入到海藻酸钠溶液中，再逐滴滴入到氯化钙溶液中，制备得到固定化细胞。
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