[发明专利]形态学计量的方法检测机体内分泌指标判断饮酒对健康的影响

权利要求书

1.权利要求项1.大鼠适量饮酒模型构建，其特征在于具体方法步骤如下：

(1)选取健康成年SD大鼠，180g～220g/只，适应性喂养

(2)一周后分为4周组(4w)、8周组(8w)、12周组(12w)3个时间点组进行灌胃，于每个时间点取对应大鼠胰腺、肝脏、睾丸组织。

2.权利要求项2.根据权利要求1所述的大鼠适量饮酒模型的构建，还包括饮酒种类为54°董酒。

3.权利要求项3.根据权利要求1步骤(2)中的分组处理其特征还应包括：每个时间点又分为低剂量组(Low dose group，LG，0.8ml/kg·d)、中剂量组(Middle dose group，MG，1.6ml/kg·d)、高剂量组(High dose group，HG，2.4ml/kg·d)，按相应剂量进行灌胃。

4.权利要求项4.取材后采用免疫组化SABC法、图像分析法进行研究。

5.权利要求项5.根据权利要求4所述的研究方法，其特征还包括：按上述时间点处死动物，取胰腺、睾丸、垂体组织，经4％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，制成4μm连续切片，每例3张切片，切片间隔56μm，用作免疫组化染色及图像分析。

6.权利要求项6.根据权利要求4所述的研究方法，其特征还包括：

(1)免疫组织化学法(SABC法)

切片化蜡入水，常温下10％甲醇-H₂O₂10min，羊血清(1:50)室温下封闭30min，滴加相应待测指标一抗，4℃孵育过夜，羊抗兔IgG(1:100)37℃孵育30min，SABC复合物(1:100)37℃孵育30min，DAB显色，苏木精复染细胞核，中性树脂封片。

(2)图像分析

随机选取正常对照组及4w、8w、12w各剂量组的大鼠睾丸、胰腺、垂体切片，各取3例。在40倍物镜下，每例切片随机选取5个视野。用Image pro plus图像分析系统检测相应器官待测指标阳性细胞的平均光密度。

7.权利要求项根据权利要求5所述的方法，其特征还包括：免疫组织化学显色时间、条件一致，图像分析过程中曝光时间一致。