[发明专利]阿司匹林在制备预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌转移的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及阿司匹林在预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌的药物中的应用。

背景技术

全球90％人类均能被EB病毒(Eptein-Barr virus,EBV)感染，且长期处于潜伏感染状态。其与与鼻咽癌(NPC))的发生发展密切相关。目前临床治疗上主要以放射、化疗治疗为主。只有在患者处于I、II期时，放疗可获得较好的治疗效果。但实际情况是，鼻咽癌发病部位隐蔽，大部分患者就诊时，病情已经发展到晚期，放化疗效果不理想，而且容易发生转移。转移是导致晚期患者死亡的主要有原因。阿司匹林是一种历史悠久的解热镇痛药，现多用于预防血栓、心脏病等疾病，尚未有其关于转移方面的研究与应用。EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)EB病毒的主要癌蛋白，能够诱导多种信号通路(如，NF-κB、MAPK kinase(ERK，p38和JNK)、JAK/STAT)，引起上皮细胞形态与表型的改变，促进上皮间质转换(EMT)，导致肿瘤细胞侵袭转移。在低分化和未分化鼻咽癌组织中，EB病毒潜伏蛋白1(LMP1)几乎都能被检测到，且越来越多的研究结果表明，EB病毒的作用伴随着鼻咽癌的发生发展。前期研究发现，EBV LMP1与鼻咽癌转移呈正相关。

MicroRNAs是一类高度保守的非编码小RNA，主要通过与靶基因的3'末端非翻译区互补配对、从而抑制靶基因的转录和表达，抑制基因的表达，调控机体多种而复杂的生命活动进程。越来越多的证据表明miRNAs表达异常参与肿瘤的发生发展有密切关系。发明人前期研究已证明,在EBV相关的鼻咽癌中，LMP1能够通过NF-κB的活化使miR-203低表达或表达缺失，促进肿瘤细胞EMT。

外泌体是一类大小为30至150nm的胞外囊泡亚群。绝大多数细胞均能产生外泌体。外泌体包含各种生物大分子，包括DNA，miRNA，mRNA，蛋白质和其他生物活性分子，其通过转移上述分子介导细胞与细胞间的通信，调控受体细胞各项复杂生命活动过程，是微环境中的一种重要介质。研究证明，从肿瘤细胞释放的外泌体能影响肿瘤的形成，生长，转移和耐药。现已观察到EBV阳性肿瘤细胞能够分泌含有LMP1的外泌体。某些蛋白或分子可在外泌体中富集，进入血液，从而比直接检测更容易。

发明内容

本发明的目的在于提出阿司匹林(ASP)抑制EBV相关鼻咽癌的转移，为该类型患者提供转移方面的预防和治疗新策略。并结合检测血清外泌体中LMP1和miR-203的表达，辅助诊断患者转移发生的风险性，并及时给予ASP的治疗，有效抑制肿瘤的转移，为鼻咽癌的抗转移治疗提供了新的策略。

我们研究表明，在鼻咽癌组织样本中，LMP1与miR-203表达呈负相关。ASP处理肿瘤细胞，抑制NF-κB的活化，促进miR-203表达。并且，ASP通过抑制EBV阳性细胞中LMP1的外泌并增加miR-203的外泌，抑制NPC细胞的EMT和转移。在外泌体中，LMP1和miR-203也存在负性关系。在裸鼠实验中，通过注射具有高转移性的NPC细胞5-8F，并对实验组裸鼠给以ASP治疗，对照组不进行ASP处理。结果显示，与对照组相比，肿瘤细胞5-8F转移到肺组织的概率明显降低。这些研究结果提示，在EBV相关鼻咽癌中，ASP能够作为抑制鼻咽癌患者转移的预防和治疗新药物(ASP能够抑制具有高转移性鼻咽癌细胞系5-8F的转移)，并结合检测外泌体中LMP1和miR-203的表达，为鼻咽癌患者转移的诊断、预防和治疗提供新的方法。ASP在EB病毒相关性鼻咽癌转移的治疗应用中，具有巨大潜力。

本发明中判定给予ASP治疗的辅助性检测指标与方法，即为检测血清外泌体中LMP1和miR-203的表达。该检测方法流程为：(1)提取鼻咽癌患者血清外泌体47例，正常人血清11例，提取总RNA；(2)以总RNA为模板，逆转录为cDNA；(3)以LMP1和miR-203特异性引物，荧光定量PCR检测LMP1和miR-203的表达，β-actin和U6分别为内参基因。定量ΔCT＝待测基因LMP1与内参基因平均ΔCT值的差值，判断ΔCT是否小于过等与2.46，当ΔCT≤2.46时，提示LMP1高表达，患者转移风险大，考虑给予患者ASP治疗；或者定量ΔCT＝待测基因miR-203与内参基因U6平均ΔCT值的差值，判断ΔCT是否小于或等于3.15，当ΔCT≤3.15时，提示miR-203高表达，患者肿瘤转移风险小，不需要给予患者ASP治疗。上述方法中，荧光定量PCR时，所用的LMP1的特异性引物为：正向：5'-TGAACACCACCACGATGACT-3'(SEQ ID NO.1)