[发明专利]一种基于微流控芯片的用于多重核酸扩增产物荧光检测的方法

权利要求书

1.一种用于多重核酸扩增产物荧光检测的离心式微流控芯片，所述微流控芯片为圆形；其包括多个操作单元，每个所述操作单元均包括加样孔、扩增腔室、虹吸管道、缓冲管道、预分配室、检测腔室、废液腔和自通气管道；所述预分配室和所述检测腔室的体积相同；所述扩增腔室采用圆形结构；

所述扩增腔室与所述加样孔连接，所述扩增腔室远离旋转中心一端依次经所述虹吸管道和所述缓冲管道与所述预分配室连接；

所述预分配室设置多个，多个所述预分配室通过缓冲管道连通，且多个所述预分配室与缓冲管道的连接处距离旋转中心的长度根据进样的先后顺序依次增大；将距离旋转中心的长度最大的所述预分配室设置为废液腔；除所述废液腔以外的每个所述预分配室下方均设置有检测腔室；

所述废液腔还与所述自通气管道一端连接，所述自通气管道另一端与所述扩增腔室靠近旋转中心一侧连接；

全封闭的所述微流控芯片中的气体通过所述自通气管道进行自循环；

所述微流控芯片还包括第一界面阀、第二界面阀和第三界面阀；所述虹吸管道上设置有所述第一界面阀，所述第一界面阀与旋转中心之间的距离大于所述扩增腔室与旋转中心的最小距离；每个所述预分配室下方均通过所述第二界面阀与所述检测腔室连接；位于所述扩增腔室上方的自通气管道上设置有所述第三界面阀。

2.根据权利要求1所述的离心式微流控芯片，其特征在于：所述虹吸管道亲水化修饰；

或，所述第一界面阀和所述第三界面阀表面疏水化修饰。

3.根据权利要求1或2所述的离心式微流控芯片，其特征在于：所述预分配室与缓冲管道的连接处距离旋转中心的最大长度与最小长度之差为3mm-9mm。

4.根据权利要求1或2所述的离心式微流控芯片，其特征在于：

所述微流控芯片是由高分子聚合物、玻璃、硅和金属材料中的一种或多种制成；

所述高分子聚合物为聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯或聚碳酸酯。

5.根据权利要求1或2所述的离心式微流控芯片，其特征在于：

所述操作单位的个数为2个；

每个所述操作单元的所述检测腔室和预分配室的个数均为7个；

所述预分配室与所述缓冲管道的连接处距离旋转中心的最大长度与最小长度之差为3mm。

6.一种检测多重核酸扩增产物的方法，包括如下步骤：将多重核酸扩增产物分成若干份，每份与相应的荧光探针杂交，根据荧光强度对所述多重核酸扩增产物进行定性或定量判定；其中每份对应的荧光探针序列不同但荧光基团相同。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）将多重核酸扩增体系通过权利要求1-5任一所述的微流控芯片上的加样孔加入到所述微流控芯片的扩增腔室内，得到待反应的芯片，将所述待反应的芯片进行多重扩增反应，得到反应后芯片；所述反应后芯片的扩增腔室中含有多重核酸扩增产物；

（2）将所述反应后芯片进行第一次离心，通过离心作用，使所述多重核酸扩增产物突破所述微流控芯片的第一界面阀；然后进行第二次离心，通过毛细作用，使所述多重核酸扩增产物填满所述微流控芯片的虹吸管道；然后进行第三次离心，通过虹吸作用，使所述多重核酸扩增产物依次填满所述微流控芯片的预分配室；然后进行第四次离心，通过离心作用使所述预分配室内的多重核酸扩增产物突破所述微流控芯片的第二界面阀，进入到所述微流控芯片的检测腔室内，分别与每个所述检测腔室中预点样的荧光探针杂交，得到杂交后芯片；

所述第一次离心的转速和所述第三次离心的转速高于第二次离心的转速，所述第四次离心的转速高于所述第三次离心的转速；

每个所述检测腔室中预点样的荧光探针中的荧光基团相同；

（3）使用单荧光通道检测所述杂交后芯片中的每个检测腔室中的多重核酸扩增产物的荧光强度，实现对所述多重核酸扩增产物的荧光检测。