[发明专利]硫酸软骨素钠的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种硫酸软骨素钠的制备方法。

背景技术

硫酸软骨素钠是从动物组织中提取的一种酸性粘多糖类物质，多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨、牛马中膈和气管中，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β₁→3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。

硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物，还具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。

目前硫酸软骨素钠采用的是碱盐消化沉淀法，即软骨经碱化后，酶解、过滤后用酒精直接沉淀，按此方法生产硫酸软骨素钠含量和纯度均较低。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种硫酸软骨素钠的制备方法，可有效解决现有技术生产硫酸软骨素钠含量和纯度均较低的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种硫酸软骨素钠的制备方法，包括以下步骤：

(1)提取：将猪软骨和水按重量比为1:3-5混合，加热煮沸20-40min，然后加入2-3％猪软骨重量的氯化钠，再用氢氧化钠溶液调节pH值至8-11；

(2)超声波酶解：向步骤(1)所得物中加入复合酶，混合，在以超声为介质的条件下进行酶解，超声时间为20-30min，超声功率为250-300W，单次超声时间为2-4s，超声时间与间歇时间比为2-5:1，然后离心，过滤，得滤液；其中，所添加的复合酶占步骤(1)所得物重量的2-5％；

(3)微波提取：向步骤(2)所得滤液中继续加入复合酶，混合，然后置于微波提取器中提取，微波功率为250-300W，提取时间为5-10min；其中，所添加的复合酶占步骤(2)所得物重量的1-3％；

(4)酶解：向步骤(3)所得物中加入蛋白酶，用氢氧化钠溶液调节pH值至8-10，置于50-60℃条件下搅拌40-60min，再用盐酸调节pH值至6-6.5，静置，过滤，得滤液；其中，所添加的蛋白酶占步骤(3)所得物重量的2-4％；

(5)沉淀：将步骤(4)所得滤液温度维持在50-60℃，加入95％乙醇，静置至沉淀量不再增加，过滤，得沉淀物；其中，步骤(4)所得滤液与95％乙醇的体积比为2-3:1；

(6)脱色：将步骤(5)所得沉淀物加入氯化钠溶液溶解，用氢氧化钠溶液调节pH值至8-10，再将溶液升温至35-40℃，加双氧水静置氧化脱色2-3h，过滤，得滤液；其中，所加氯化钠溶液的质量浓度为2-5％，沉淀物占氯化钠溶液重量的10-15％，双氧水占氯化钠溶液的0.5-0.8％；

(7)沉淀：将步骤(6)所得滤液用盐酸调节pH值至5.8-6.0，然后加乙醇使沉淀度数达60-70度，沉淀5-8h，再向沉淀物中加乙醇，使沉淀度数达80-90度，沉淀5-8h，收集沉淀物；

(8)脱水：向步骤(7)所得沉淀物中加75％乙醇浸泡2次，真空干燥，得硫酸软骨素钠成品。

进一步地，步骤(2)中所添加的复合酶占步骤(1)所得物重量的3％。

进一步地，复合酶为蛋白酶、脂肪酶和核酸酶按质量比为6-8:0.8-1.2:0.2-0.4混合的混合物。

进一步地，复合酶为蛋白酶、脂肪酶和核酸酶按质量比为8:1.0:0.2混合的混合物。

进一步地，蛋白酶、脂肪酶和核酸酶酶活均为3.5万U/g。

进一步地，步骤(2)中超声时间为30min，超声功率为280W，单次超声时间为3s，超声时间与间歇时间比为4:1。

进一步地，步骤(3)中微波功率为280W，提取时间为8min。

进一步地，步骤(3)中所添加的复合酶占步骤(2)所得物重量的1.8％。

进一步地，步骤(4)中所添加的蛋白酶占步骤(3)所得物重量的2.5％。

进一步地，步骤(7)中加乙醇使沉淀度数达65度，沉淀8h，再向沉淀物中加乙醇，使沉淀度数达80度，沉淀6h。

本发明提供的一种硫酸软骨素钠的制备方法，具有以下有益效果：