[发明专利]用于检测8-OHdG的适配体功能化磁纳米材料及其应用

说明书

本发明涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种用于检测8‑OHdG的适配体功能化磁纳米材料及其应用。所述适配体功能化磁纳米材料，其由生物素化8‑OHdG适配体修饰到磁纳米颗粒表面得到。该适配体功能化磁纳米材料可与液相色谱‑串联质谱技术联用，针对8‑OHdG进行检测，该方法具有灵敏度高、选择性好，操作简单、快速等优点。

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种用于检测8-OHdG的适配体功能化磁纳米材料及其应用。

背景技术

8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine，8-OHdG)是一种DNA氧化损伤产生的加合物，也是灵敏和有效示踪DNA氧化损伤的有效生物标记物。其是指在受到化学物质、电离辐射、吸烟以及空气污染等因素的影响下，体内产生的大量活性氧自由基，致使氧化损伤产生的氧化加合物，若该损伤未被及时修复或被错误修复时，即会引起基因突变，而此突变若发生在功能基团的表达序列，将会导致肿瘤等疾病的发生。因此，DNA氧化加合物的形成代表着化学致癌过程中的一个早期的、可检测的关键阶段。在已发现的二十几种DNA氧化损伤产物中，8-OHdG性能稳定，不受饮食等因素影响，可从体液如血浆和尿样中检出，可实现无创伤性检测。为此，8-OHdG已被公认为氧化损伤的一种主要生物标记物。但是由于尿样中8-OHdG含量非常低、基质干扰很大，分析中常用固相萃取进行样品富集，萃取材料主要有C18和HLB等通用型非选择性材料，在处理尿样时，费时费力，缺乏选择性，严重干扰了含量很低8-OHdG分离分析。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于检测8-OHdG的适配体功能化磁纳米材料，其特异性好，灵敏度高，可克服固相萃取及材料的不足。

本发明的第二目的在于提供一种基于适配体功能化磁纳米材料富集分离8-OHdG的方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明为了弥补现有富集技术不足，提供了一种用于检测8-OHdG的适配体功能化磁纳米材料，其由生物素化8-OHdG适配体修饰到磁纳米颗粒表面得到；

所述8-OHdG适配体的序列如SEQ ID NO:1所示。

核酸适配体(Aptamer)是一种单链的寡核苷酸，多为单链DNA，长度在10～100bp之间，通常是利用特异的靶标从随机序列的寡核苷酸文库中通过体外筛选获得，作为一种新型生物识别分子，可以与靶标物质高亲和力特异性结合。

本发明涉及的核酸适配体是已知并成功从体外合成的随机寡核甘酸文库中通过指数富集配体的系统进化技术筛选得到的与靶物质特异性结合的一簇DNA片段(序列如SEQID NO:1所示)。该适配体的亲和力(平衡解离常数Kd)为0.1mmol/L。利用8-OHdG核酸适配体特异性和磁纳米材料易分离性可以快速和选择性从尿液中提取出8-OHdG，克服了固相萃取及材料的不足。

本发明提供的用于检测8-OHdG的适配体功能化磁纳米材料可特异性地与8-OHdG结合，还具有灵敏度高、线性范围广等优点，并且磁纳米颗粒在进行纯化的时候操作简单，利用推广使用。

优选的，如上所述的适配体功能化磁纳米材料，所述磁纳米颗粒是通过戊二醛交联作用在氨基化三氧化二铁表面修饰醛基，再将亲和素修饰到磁纳米表面得到。

优选的，如上所述的适配体功能化磁纳米材料，所述生物素化8-OHdG适配体修饰到磁纳米颗粒表面的过程具体包括：

将所述磁纳米颗粒于PBS中超声分散，加入生物素化8-OHdG适配体单链并孵育，磁分离后，清洗除去未与所述磁纳米颗粒连接的单链。

一种基于如上所述的适配体功能化磁纳米材料的检测8-OHdG的方法，包括：