[发明专利]具有DPP-Ⅳ抑制功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种具有DPP‑Ⅳ抑制功能的鱼皮蛋白肽，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明针对目前鱼类加工产业的快速发展，鱼皮蛋白资源数量的快速增加，根据鱼皮蛋白的特性，以鱼皮为原料，通过对鱼皮超声波和高温高压等预处理，利用多种蛋白酶分步酶解技术，通过膜分离、凝胶分离及高效液相色谱分离技术，所得鱼皮蛋白肽粉中序列如SEQ ID NO:1和2所示的鱼皮蛋白肽的含量占鱼皮蛋白肽粉总重的50％以上，建立了一套简单高效的具有DPP‑Ⅳ抑制功能的鱼皮蛋白肽的制备方法。

技术领域

本发明涉及鱼类DPP-IV抑制肽及其制备方法和用途，具体地说，涉及一种具有DPP-Ⅳ抑制功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法与应用。

背景技术

降血糖功能因子是指能降低糖尿病患者血糖浓度以及改善其症状的生物活性成分。目前研究较多的天然产物类降糖因子、矿物质类降糖因子、维生素类降糖因子，其作用机理各不相同。天然产物类降糖因子按化学结构可分为黄酮类、活性多糖类、生物碱类、皂甙类、萜类、共轭亚油酸、多肽类等。自人工合成胰岛素以来，磺脲类药物、双胍类、胰岛素增敏剂、糖抑制剂等各种口服或注射的药物相继问世，然而化学药物常产生一定的毒副作用，天然降血糖成分具有作用温和而持久，性质稳定，几乎无毒性反应，还可多种降糖成分并存，综合起作用等优点，备受患者以及和医学界的青睐，成为降血糖功能因子的主要研究方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有DPP-Ⅳ抑制功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法。

本发明的另一目的是提供所述鱼皮蛋白肽在医药、食品及保健品中的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供的具有DPP-Ⅳ抑制功能的鱼皮蛋白肽，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。

含有上述鱼皮蛋白肽的鱼皮蛋白肽粉可按照如下方法制备，包括以下步骤：

(1)将冷冻鱼皮在8-12℃条件下进行解冻清洗，鱼皮清洗后用打浆机将鱼皮打成浆，加入鱼皮重量1.5-2.5倍的水，于125-135℃保温30-60分钟；

(2)将鱼皮蛋白浆的温度下调至60-70℃，进行超声处理(超声处理旨在改变鱼皮蛋白的组织结构)；超声处理在超声波发生器内进行，超声波的频率为70-90kH，处理时间25-35分钟；

(3)将经过超声后鱼皮蛋白浆的温度上调至115-125℃，于115-125℃煮制150-180分钟，然后离心取上清液；

(4)按照鱼皮重量0.10-0.20％的比例向(3)的上清液中加入复合蛋白酶进行分步酶解：第一步向上清液中加入鱼皮重量0.05-0.10％的复合蛋白酶I(由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按质量比1:1-2组成，其中碱性蛋白酶的酶活为80-100万U/g，胰蛋白酶的酶活为50-60万U/g)，于50-65℃酶解1.0-2.0h；第二步向上述酶解体系中加入鱼皮重量0.05-0.10％的复合蛋白酶II(由菠萝蛋白酶和风味蛋白酶按质量比1:1组成，其中菠萝蛋白酶的酶活为20-30万U/g，风味蛋白酶的酶活为40-60万U/g)，于55-65℃酶解1.0-2.0h；然后在95-98℃下保温10-20分钟，冷却至室温，用活性炭过滤，收集上清液；

(5)对步骤(4)所得上清液进行超滤处理，先用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，将分子量小于5000的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的滤滤膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来；

(6)分子量小于3000的蛋白肽液再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰，再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，取第15-17分钟收集的肽溶液；

(7)将步骤(6)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到含有权利要求1所述鱼皮蛋白肽的鱼皮蛋白肽粉。