[发明专利]具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽及其制备方法与应用

权利要求书

1.具有抗氧化功能的鱼皮蛋白肽粉，其特征在于，所述鱼皮蛋白肽粉的制备方法包括以下步骤：

(1)将冷冻鱼皮在8-12℃条件下进行解冻清洗，鱼皮清洗后用打浆机将鱼皮打成浆，加入鱼皮重量1.5-2.5倍的水，于120-130℃保温30-60分钟；

(2)将鱼皮蛋白浆的温度下调至60-70℃，进行超声处理；超声处理在超声波发生器内进行，超声波的频率为50-60kH，处理时间25-35分钟；

(3)将经过超声后鱼皮蛋白浆的温度上调至115-125℃，于115-125℃煮制90-150分钟，然后离心取上清液；

(4)按照鱼皮重量0.15-0.30％的比例向(3)的上清液中加入复合蛋白酶进行分步酶解：第一步向上清液中加入鱼皮重量0.10-0.15％的复合蛋白酶I，于50-55℃酶解0.5-1.0h；第二步向上述酶解体系中加入鱼皮重量0.05-0.15％的复合蛋白酶II，于50-60℃酶解0.5-1.0h；然后在95-98℃下保温10-20分钟，冷却至室温，用活性炭过滤，收集上清液；

(5)对步骤(4)所得上清液进行超滤处理，先用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，将分子量小于5000的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的滤膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来；

(6)分子量小于3000的蛋白肽液再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第1个洗脱峰，再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，取第7-9分钟收集的肽溶液；

(7)将步骤(6)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到含有序列如SEQ ID NO:1和2所示的鱼皮蛋白肽的鱼皮蛋白肽粉；SEQ ID NO:1和2所示的鱼皮蛋白肽的含量占鱼皮蛋白肽粉总重的50-53％；

其中，步骤(4)的复合蛋白酶I由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按质量比1-2:1组成，其中碱性蛋白酶的酶活为70-100万U/g，胰蛋白酶的酶活为40-60万U/g；复合蛋白酶II由木瓜蛋白酶和风味蛋白酶按质量比1-2:1组成，其中木瓜蛋白酶的酶活为30-60万U/g，风味蛋白酶的酶活为50-90万U/g；

所述鱼皮来自鲢鱼、罗非鱼；

步骤(6)RP-HPLC的条件为：0-5min，流动相为纯水；流动相B：含0.1％TFA的乙腈，5-10min流动相B，从0％到35％，10-15min，流动相B从65％到95％，15-30min，流动相B从95％到0％，30min停止；所用色谱柱为：Kromasil C18，5μm，4.6×250mm。

2.权利要求1所述鱼皮蛋白肽粉在制备药品、保健食品、化妆品和食品添加剂中的应用。

3.含有权利要求1所述鱼皮蛋白肽粉的药品、保健食品、化妆品和食品添加剂。