[发明专利]抑制心肌肥厚的重组蛋白基因及其表达产物和应用

说明书

本发明公开了一种重组蛋白基因和包含该基因的重组质粒，以及该重组质粒表达蛋白的制备及应用。该重组AGGF1蛋白能通过抑制心肌肥厚小鼠心脏的肥厚，改善小鼠心功能，抑制心肌细胞凋亡和心脏纤维化，最终抑制心衰。因此，所述重组AGGF1蛋白能制备抗心肌肥厚药物，用于心肌肥厚疾病和心衰的治疗。

技术领域

本发明属于生物医药领域，更具体地，涉及一种重组蛋白及其应用。

背景技术

心肌肥厚是机体对生理及病理上压力所产生的一种适应性应答，它是心血管疾病患病病人死亡率升高的一个独立危险因素。心脏为了应答压力负荷，个体的心肌细胞开始机械性的拉伸并且激活细胞内的促肥厚信号途径，导致胚胎期的转录因子再次被激活，并且各种蛋白质的合成增多，如各种结构蛋白及收缩相关蛋白。这些蛋白合成增多会导致心肌结构紊乱，心脏收缩力降低，氧耗增多，供血不足，最终会导致心力衰竭，心律失常或者猝死等。

诸如高血压，心肌梗死，心脏瓣膜病变，动脉粥样硬化及一些遗传性心脏病都会导致心肌肥厚的发生，往往我们认为心肌肥厚是不可逆的。因此，如何有效控制心肌肥厚的发生，成为了临床干预的基础。探明心肌肥厚疾病分发病机理及寻找有效的干预方法，具有重要的临床及研究意义。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种重组蛋白及其应用，其目的在于通过所述重组蛋白制备抗心肌肥厚及心衰的药物，有效控制心肌肥厚的发生和临床干预。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种抑制心肌肥厚的重组蛋白基因AGGF1，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

按照本发明的另一方面，提供了一种抑制心肌肥厚的重组蛋白基因AGGF1的克隆方法，使用SEQ ID NO：3所示的正向引物和SEQ ID NO：4所示的反向引物,应用PCR方法从人的cDNA中克隆得到AGGF1基因。

按照本发明的另一方面，提供了一种表达抑制心肌肥厚的重组蛋白的重组质粒，该质粒由以下步骤制得：

(1)将AGGF1基因与His标签序列连接，所述AGGF1基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列；

(2)将步骤(1)中得到的连接有His标签序列的AGGF1基因序列插入到表达载体的多克隆酶切位点处，得到重组质粒。

优选地，所述的表达载体为pet28a。

按照本发明的另一方面，提供了一种抑制心肌肥厚的重组蛋白，该蛋白的氨基酸序列为：

(1)由SEQ ID NO：2氨基酸序列所示；或

(2)与序列SEQ ID NO：2限定的氨基酸序列同源性在80％至100％编码相同功能蛋白质的氨基酸序列；或

(3)SEQ ID NO：2限定的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸，具有与序列SEQ ID No：2序列所示的蛋白质具有同等活性的氨基酸序列。

按照本发明的另一方面，提供了一种抑制心肌肥厚的重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人源AGGF1基因与His标签序列连接后，插入到原核表达载体pet28a的多克隆酶切位点处，构建含有AGGF1基因的重组质粒pet28a-AGGF1，所述AGGF1基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列；；

(2)将步骤(1)所述的的重组质粒转染进入原核细胞，并通过抗生素抗性筛选，得到具有抗生素抗性的阳性细胞克隆；

(3)将步骤(2)中得到的阳性细胞克隆扩增培养后，分离纯化后得到所述的抑制心肌肥厚的重组蛋白。