[发明专利]一种用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法

权利要求书

1.一种用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，其包括下述步骤：

(1)样品预处理：取生物基质样品，加入内标物甲基硒代半胱氨酸，然后用蛋白质沉淀法处理所述生物基质样品，离心得到上清液；

(2)含量测定：采用高效液相色谱串联质谱色谱法，将步骤(1)中上清液注入色谱仪，采用内标标准曲线法计算生物基质样品中硒代蛋氨酸的浓度。

2.根据权利要求1所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述生物基质样品包含全血、血浆、血清、乳汁、心、肝、脾、肺、肾、胃、肠道、生殖腺、脑、体脂、肌肉、胆汁、尿液或粪便中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述用蛋白质沉淀法处理所述生物基质样品的的方法包括下述步骤：在生物基质中加入内标物甲基硒代半胱氨酸，然后加入高氯酸进行处理。

4.根据权利要求3所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述高氯酸的质量浓度为5-10％，所述高氯酸与生物基质样品的体积比为1:1。

5.根据权利要求1-4任一项所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱的色谱条件为：色谱柱为Acquity XEVO HSS T3，流动相A为0.1-0.5％甲酸水溶液，流动相B为0.1-0.5％甲酸乙腈溶液进行梯度洗脱；

所述高效液相色谱串联质谱的质谱条件为：采用电喷雾离子化电离源，正离子方式检测，多反应监测进行二级质谱分析。

6.根据权利要求1-5任一项所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述内标物的制备方法包括下述步骤：取内标物甲基硒代半胱氨酸，加水溶解，得到浓度为1-5mg/ml的内标物标准储备液，然后将内标物标准储备液用水稀释，得到内标物的浓度为1-5μg/ml。

7.根据权利要求1-6任一项所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，还包括标准样品制备的步骤，所述步骤包括下述处理操作：取硒代蛋氨酸，加水溶解，得到浓度为1mg/ml的标准储备液，然后加水进行稀释，得到浓度为20-2000ng/ml的一系列浓度递增的标准工作液；取空白生物基质样品，加入上述一系列浓度递增的标准工作液，得到一系列标准样品。

8.根据权利要求7所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述一系列标准样品的浓度范围为2-200ng/ml。

9.根据权利要求1-8任一项所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述生物基质是大鼠生物基质。

10.根据权利要求1-8任一项所述的用于测定生物基质中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述生物基质是采自大鼠的血浆。