[发明专利]神经识别分子contactin 6的抗原和抗体及应用

说明书

本发明涉及一种神经识别分子contactin 6的抗原，抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了一种采用上述抗原所制备的神经识别分子contactin 6的抗体。本发明进一步公开了上述抗体在制备治疗脊髓损伤药物中的应用。本发明的抗体可以有效阻断contactin 6的同源性结合，促进神经轴突的生长，该抗体在脊髓损伤中使用可以促进神经轴突的再生和功能改善。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种神经识别分子contactin 6的抗原和抗体及应用。

背景技术

脊髓损伤后的功能恢复过程中，控制自主运动的皮质脊髓束的轴突再生一直是脊髓损伤领域研究热点之一。在脊髓损伤之后，反应性胶质细胞、小胶质细胞、成纤维细胞、巨噬细胞和血管外周膜细胞等组成的瘢痕组织，构成了阻止轴突再生的屏障。各种生长抑制分子以及轴突导向分子会相应地被诱导并抑制轴突的生长。把损伤处的抑制因子去除能够使存活下来的轴突重新出芽生长，但并不足以导致轴突再生。研究发现，神经元的内在生长能力在调控轴突再生过程中起了很重要的作用，但是瘢痕形成细胞如何调控神经元的内在生长能力仍然有待研究。

Contactin家族作为免疫球蛋白超家族中神经识别分子亚家族，特异性地表达在神经系统中，目前为止共发现六个成员：F3/contactin、TAG-1、BIG-1、BIG-2、NB-2和contactin 6。受损的轴突上诱导表达的contactin 6和反应性星形胶质细胞上诱导表达的contactin 6的反式同源性相互作用，会把信号从反应性胶质细胞上向神经元传递，引起轴突再生的接触性抑制。目前还没有针对contactin 6蛋白的促进轴突再生的抗体作为临床应用。

目前，促进轴突再生的相关技术，包括针对Nogo的抗体设计专利，以及针对CSPGs降解的PTPs酶类设计专利。前者在使用的抗体在体检测时，无论在脊髓损伤还是脑缺血领域都能观察到促进轴突再生的现象，但涉及到利用转基因小鼠阐明具体Nogo－NgR以及其下游信号转导机制时，关于其促进再生作用一直存在很强的争议。而PTP家族的酶类种类较多，但目前仅少数种类(比如PTP sigma)对促进轴突再生具有一定的作用，但具体机制依然有待进一步阐明。无论是哪种相关技术，涉及抗体或酶的亲和性和特异性，均依赖于近年来迅速发展的噬菌体筛选，碱基回复突变等手段优化序列设计，来改善关键作用位点的识别和功能检测确认，从而能获得最佳的产物。

目前国内在脊髓损伤领域尚没有针对轴突再生的抗体。而在国外，之前的抗体在设计时，由于没有结构生物学和生物信息学等方面的深度解析，导致抗体往往缺乏足够的特异性和亲和性，抗体结合部位构象形成的微环境很难实现进一步优化；另外，某些多克隆抗体的功能阻断效果，相对于单克隆抗体，缺乏足够针对性和特异性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种神经识别分子contactin 6的抗原和抗体及应用，本发明的抗体可以有效阻断contactin 6的同源性结合，促进神经轴突的生长，该抗体在脊髓损伤中使用可以促进神经轴突的再生和功能改善。

在一方面，本发明提供了一种神经识别分子contactin 6的抗原，抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

在又一方面，本发明还提供了一种神经识别分子contactin 6的抗体，抗体是上述抗原制备而成的抗体。

进一步地，抗体为单克隆抗体。

进一步地，抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)使用上述contactin 6抗原免疫小鼠，刺激小鼠B淋巴细胞克隆分化为致敏B淋巴细胞；

(2)提取小鼠的脾细胞，将骨髓瘤细胞与脾细胞混合后，形成杂交瘤细胞；

(3)采用有限稀释法在HAT培养基中培养杂交瘤细胞，筛选出阳性杂交瘤细胞；