[发明专利]一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法

权利要求书

1.一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)先将捕获探针与亲和素修饰的磁纳米粒子混匀、孵育，使捕获探针修饰到磁纳米粒子表面，得到捕获探针功能化的磁纳米粒子；所述捕获探针功能化的磁纳米粒子能够结合金黄色葡萄球菌的目标DNA序列；

(2)将捕获探针功能化的磁纳米粒子与含目标DNA序列的待测液孵育，然后加入信号探针，使目标DNA序列与捕获探针、信号探针生成夹心结构；所述信号探针上包含滚环扩增引物；

(3)加入滚环扩增模板，然后滚环扩增引物与相应包含DNA酶互补序列的模板互补配对引发滚环扩增反应合成DNA酶；

(4)利用DNA酶进行催化H₂O₂-鲁米诺化学发光反应系统，根据相对发光值的变化来定量检测金黄色葡萄球菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括先配制一定含有不同浓度的目标DNA序列的标准样品，建立不同浓度的目标DNA序列与相对发光值的标准曲线，当检测待测样品时，将利用待测样品得到的相对发光值代入到标准曲线中，即得到待测样品中的目标DNA序列的浓度。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标DNA序列为CCT TTG ACA ACT CTA GAG ATA GAG CCT TC。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌是来源于食品中的金黄色葡萄球菌。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述捕获探针的序列为：biotin-TTT TTT GAA GGC TCT ATC TCT。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述信号探针的序列为：AGA GTT GTC AAA GGT TTT TTA GGA TCG TGT GGT T。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA酶的序列为：TGG CTG AGT TTT GGG TTG GGC GGG TTG GGT。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述相应包含DNA酶互补序列的模板序列为：P-ACC GAC TCA AAA CCC AAC CCG CCC TAC CCA AAA CCC AAC CCG CCC TAC CCA AAC ATA CAC ACA GCA。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磁纳米粒子的浓度为0.8～1.2mg/mL。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述捕获探针的的浓度为80～160nmol/L。