[发明专利]一种离液剂以及使用该离液剂提取基因组DNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种快速分离组蛋白与基因组DNA的离液剂，以及提取DNA的方法。

背景技术

对包括人在内的真核生物而言，一个生物体的基因组DNA是指包含在该生物的DNA中的全部遗传信息。基因组DNA 和组蛋白通过非共价键结合在一起，因此，如何将DNA和组蛋白进行分离，这是基因组DNA提取过程中的关键及难点所在。事实上，不同的基因组DNA提取方法，前期样本预处理（细胞裂解）及后期DNA的沉淀、洗涤等步骤大同小异，不同方法的核心差异在于如何将DNA和组蛋白进行有效分离。

蛋白酶K法是最经典的方法，该方法利用蛋白酶K来降解组蛋白，从而释放出基因组DNA。该方法的劣势在于：（1）蛋白酶K的孵育温度为50至65℃，需要额外的加热设备。（2）蛋白酶K对组蛋白的消化需要时间，常需0.5h-过夜，实验用时长。（3）随着放置时间的延长和反复冻融次数的增加，蛋白酶K的酶活会下降，实验重复性和稳定性较差。

为了规避蛋白酶K法的劣势，实际应用中常采用离液剂来分离组蛋白和基因组DNA。离液剂可以打破组蛋白和基因组DNA之间的非共价作用力（氢键，偶极-偶极相互作用力，疏水相互作用力），使组蛋白发生可逆性变性，从而释放基因组DNA，实现基因组DNA提取的目的。基因组DNA提取中常见的离液剂包括盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸钠、高氯酸锂。其中盐酸胍和硫氰酸胍法所用的试剂浓度高，高氯酸钠和高氯酸锂法所用试剂浓度虽然较低，但高氯酸盐中氯元素的化合价高，为+7价，试剂氧化性强。

发明内容

本发明的目的是克服蛋白酶K法和高氯酸盐法的缺陷，提供一种快速分离组蛋白与基因组DNA的离液剂，以及提取DNA的方法。

离液剂是一类能打破组蛋白和基因组DNA之间的非共价作用力的化合物，其能使组蛋白发生可逆性变性，从而释放基因组DNA，实现基因组DNA提取的目的。

本发明提供了一种离液剂，其特征在于，所述离液剂含有溴酸盐。

优选的，所述溴酸盐为溴酸钠。

将含有组蛋白及基因组DNA的样本与所述离液剂混匀后，所述溴酸钠的终浓度为0.1-3mol/L。

优选的，将含有组蛋白及基因组DNA的样本与所述离液剂混匀后，所述溴酸钠的终浓度为0.2-3mol/L。

更优选的，将含有组蛋白及基因组DNA的样本与所述离液剂混匀后，所述溴酸钠的终浓度为1-3mol/L。

本发明还提供了一种使用所述离液剂提取基因组DNA的方法，所述DNA在提取前结合在组蛋白中；其中，该方法包括如下步骤：

（1）将样本分散成细胞悬液，加入细胞裂解液使细胞破裂，释放出细胞核内的组蛋白与基因组DNA的复合物；

（2）将步骤（1）得到的物料与所述离液剂混合均匀，得到组蛋白与基因组DNA分离后的物料；

（3）将步骤（2）得到的物料与蛋白抽提液混合均匀，离心，分离得到蛋白被抽提后的上清液；

（4）将所述经蛋白被抽提后的上清液与DNA沉淀剂混合，离心后得到DNA沉淀。

该方法还包括，将所述DNA沉淀进行洗涤和再溶解。

通过上述技术方案，本发明以化学物质溴酸钠（NaBrO₃）替代蛋白酶K来解离组蛋白和基因组DNA，这种方法具有以下优点：（1）无需使用蛋白酶K，避免加热并需不时混匀等环节，操作简单，且无需加热设备。（2）避免蛋白酶K长时间消化，节省了操作时间。（3）利用化学试剂处理样本，避免蛋白酶K消化不充分的劣势，快速、充分地分离组蛋白和DNA，DNA得率高、纯度高。（4）避免蛋白酶K活性易变化的缺陷，重复性好，稳定性高。与传统蛋白酶K消化法相比，本发明能高效、快速、简便地提取包括人类在内的真核生物基因组DNA。

与高氯酸钠或高氯酸锂法相比，本发明的方法提取的基因组DNA纯度和浓度相当，但所用离液剂的卤素化合价更低（+5价），试剂氧化性较弱。所提取DNA的纯度和浓度能满足PCR基因扩增、芯片分析、分子克隆、基因（组）测序/检测等分子生物学相关实验需求。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：