[发明专利]天然软组织去细胞基质的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床医学、生物医学与再生医学技术领域，尤其是涉及一种天然软组织去细胞基质的制备方法。

背景技术

组织由细胞和细胞外基质(ECM)组成，细胞外基质是由结构蛋白和功能性蛋白形成复杂的网架结构、支持并连接组织结构，对细胞的生理活动(迁移、分化和增殖)进行调节，完成特定的功能。

与金属、塑料等非动物来源的材料相比，细胞基质的成分和结构更接近人体组织，生物相容性更优异，这使之成为组织工程修复中应用最为广泛的材料。但由于细胞外基质的三维结构复杂，难以在体外重现与体内细胞外基质组成和结构一致的细胞外基质材料。通过去细胞技术将组织中的细胞成分除去，从而获得各种天然组织的细胞外基质，是目前制备天然组织细胞外基质的有效办法。

理想的去细胞基质材料制备方法应既能有效除去组织/器官中的细胞成分，最大程度地降低基质材料的免疫原性，又能最大程度的保持基质的三维结构和原始形态，最大程度的保留其中的有效活性分子，满足组织再生修复的要求。

去细胞的过程就是通过物理方法、化学方法或者生物酶等方法除去基质中的细胞。去细胞方法的有效性取决于细胞类型、组织致密程度、组织厚度和脂肪含量等。

而传统的组织去细胞基质制备工艺容易导致基质成分和三维结构被破坏，而且试剂残留严重，植入组织中可能引起严重的免疫排斥反应。且传统的组织去细胞基质制备工艺需要耗费大量的时间才能让化学去垢剂渗透至组织内部，作用于细胞，除去组织中的细胞成分，所以，去细胞效率较低。

针对现有技术中存在的上述问题，提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种天然软组织去细胞基质的制备方法，该方法去细胞效率高，对基质成分的破坏小，去细胞基质的免疫原性低，生物相容性好。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种天然软组织去细胞基质的制备方法，该方法包括：取材，预处理，消毒，脱脂，酶处理，去细胞，漂洗和灭菌步骤。

优选地，所述天然软组织包括小肠组织，血管组织，肌肉组织，心脏组织，瓣膜组织，肺组织，脾脏组织，肾脏组织，肝脏组织，胃组织，胆囊组织，脂肪组织，软骨组织，气管组织，食道组织，膀胱组织，输尿管组织，输卵管组织或子宫组织。

优选地，所述取材，预处理为将准备脱细胞的天然软组织用生理盐水或磷酸盐缓冲溶液进行清洗，待用。

优选地，所述消毒为用过氧乙酸溶液、乙醇溶液、或新洁尔灭溶液中的一种或几种溶液的混合液进行浸泡，再用生理盐水或磷酸盐缓冲溶液漂洗。

优选地，所述过氧乙酸溶液的浓度为0.01-0.3wt％；所述乙醇溶液的浓度为1-10％；所述新洁尔灭溶液的浓度为0.05-1wt％，所述浸泡时间为0.5-12h；所述生理盐水的浓度为0.9wt％；所述磷酸盐缓冲溶液pH值为7.2-7.8，浓度为0.01M。

优选地，所述脱脂为将所述天然软组织置于脱脂剂中0.5-12h；所述脱脂剂选自三氯甲烷，二氯甲烷，丙酮、二氯乙烷和乙醇中的一种或多种；所述脱脂剂的用量为所述天然软组织体积的1-30倍。

优选地，所述酶处理为将脱脂后的天然软组织置于含有生物酶的生理盐水或磷酸盐缓冲溶液中。

优选地，所述脱脂后的天然软组织置于含有生物酶的生理盐水或磷酸盐缓冲溶液中的时间为1-48h；所述生物酶选自胰蛋白酶、胃蛋白酶或磷脂酶；所述生物酶的浓度为0.1-10wt％。

优选地，所述去细胞为将经过脱脂及酶处理后的天然软组织置于含有化学去垢剂的生理盐水或磷酸盐缓冲溶液中。

优选地，所述化学去垢剂选自TritonX-100、TritonX-200、Tween-20、Tween-40、Tween-60、脱氧胆酸钠和十二烷基磺酸钠中的一种或多种；所述化学去垢剂的浓度为0.1-5wt％。

上述方法制备的天然软组织去细胞基质。

本发明的有益效果如下：

1.脱脂处理可以将细胞膜中的脂质成分溶解除去，破坏细胞膜的完整性，有利于细胞内容物的释放，便于后续处理中将细胞内容物更彻底地除去，降低组织基质中的免疫原性。

2.生物蛋白酶处理可以特异性地作用于基质中的蛋白成分，削弱基质成分间相互作用，让后续的化学去垢剂更快渗透到基质内部，作用于基质细胞，从而缩短化学去垢剂渗透到基质中的时间，提高去细胞效率。