[发明专利]一种治疗肿瘤的药物组合

说明书

本发明提供一种治疗肿瘤的药物组合，包括Anti AFP CAR‑T细胞，和人源肝细胞生长因子过表达的人脐带间充质干细胞MSC‑HGF。本发明以Anti AFP CAR‑T细胞对肿瘤进行特异性识别以及杀伤，联合MSC‑HGF增强人体免疫功能并促进组织再生修复，从而达到在一定程度上强杀伤肿瘤细胞的效果以应用于相应肿瘤疾病的预防和治疗。

技术领域

本发明涉及一种治疗肿瘤的药物组合，属于基因修饰细胞及肿瘤治疗技术领域。

背景技术

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，简称：HCC)居恶性肿瘤发病率的第五位,全球每年死亡人数约100万。目前，大部分原发性肝癌患者缺乏有效的治疗手段,总的生存率仅为3％-5％。肝移植虽已成为治疗原发性肝癌的重要手段，但供体短缺、手术损伤、免疫排斥以及费用高昂等问题构成了肝脏器官移植技术发展的主要障碍。因此，有必要探索一种新的、有效治疗途径。随着分子生物学、基因工程技术及免疫学的飞速发展，以免疫治疗为基础的生物治疗已显示出良好的应用前景。

近年来，嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)修饰细胞为基础的肿瘤过继免疫治疗取得重大进展。修饰后的细胞不仅具有向肿瘤细胞的杀伤能力，且可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受的状态。CAR的结构一般包括识别肿瘤表面抗原的单链抗体(SCFV)、跨膜区以及细胞胞内的活化增殖信号域。表达CAR的T细胞可通过SCFV直接识别并结合肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原，CAR将信号传入T细胞内，激活T细胞分泌细胞因子包括穿孔素、颗粒酶、INF-γ、TNF-α等，从而发挥杀伤肿瘤细胞的作用。因此，CAR-T细胞是MHC非限制性的，其应用的关键是确定一种肿瘤相关抗原，在肿瘤细胞表面高表达，而在正常组织中无表达或者低表达。

甲胎蛋白(alpha-feto protein，简称：AFP)是胎儿时期肝脏内合成的一种糖蛋白,成人后血清中水平很低,发生恶变的肝细胞则又可恢复其合成的能力，其在70％-80％的原发性肝癌(HCC)中有较高的表达水平。研究证实将表达mAFP基因的小鼠肝癌细胞株Hepa1-6接种C57BL/6J小鼠，再用插入AFP基因的质粒DNA免疫小鼠，结果发现这种治疗性的免疫AFP质粒DNA能诱发较强的特异性CTL免疫反应。还有研究应用AFP来源的免疫优势多肽疫苗治疗IV期HCC患者，6例患者中5例显示AFP多肽在体内具有免疫原性,能在血清AFP水平较高的患者中刺激抗原特异性T细胞。因此，AFP作为肝癌细胞的特异性抗原,可作为CAR-T细胞抗肿瘤治疗的一个理想靶点。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，简称：MSCs)是来自于中胚层，并且可以向三个胚层分化的一类干细胞，在组织工程等方面有广泛的用途，是国内外广泛关注的一类细胞。目前从脐带的不同的组织部位都获得了间充质干细胞，而其主要来源是血管间的华通胶基质。与骨髓间充质干细胞相比，人脐带间充质干细胞(humanUmbilical CordMesenchymal Stem Cells,简称：hUCMSCs)以其易得、原始、增殖力强、免疫原性低、不涉及法律伦理等优势而越来越受到人们的重视。

肝细胞生长因子(hepatocyte growthfactor，简称：HGF)是一种肝细胞特有的血小板衍生促有丝分裂剂，可通过多个信号通路促进细胞增殖，并能促使原代培养肝细胞DNA合成和细胞分裂，并且作为一种可以诱导上皮细胞分散(细胞离散和运动)的成纤维细胞衍生因子，能诱导细胞增殖、分散、迁移、器官形态形成、血管发生等一系列生物效应，对组织修复和胚胎发育起重要作用。

发明内容

本发明提供一种治疗肿瘤的药物组合，以Anti AFP CAR-T细胞对肿瘤进行特异性识别以及杀伤，联合MSC-HGF增强人体免疫功能并促进组织再生修复，从而达到在一定程度上强杀伤肿瘤细胞的效果以应用于相应肿瘤疾病的预防和治疗。