[发明专利]Anti MUC1 CAR-T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种Anti MUC1 CAR‑T细胞及其制备方法和应用，所述Anti MUC1 CAR‑T细胞在T细胞内表达SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白；所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述SCFV用于结合所述MUC1蛋白，并且所述SCFV的氨基酸序列为第一序列。该细胞经过对T细胞修饰和改造得到，并且能够特异性识别和杀伤腺癌，适用于相应肿瘤疾病的预防和治疗。

技术领域

本发明涉及一种Anti MUC1 CAR-T细胞及其制备方法和应用，属于基因修饰细胞及肿瘤治疗技术领域。

背景技术

在肿瘤免疫治疗方法中，淋巴细胞免疫技术包括细胞因子诱导杀伤细胞、细胞毒性T淋巴细胞和浸润性T淋巴细胞等在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，并取得一些临床疗效，但其为非特异性免疫作用，由于肿瘤细胞本身免疫逃逸和抗原隐蔽性，其对体内肿瘤细胞清除还非常有限。嵌合抗原受体基因修饰淋巴细胞技术的出现为临床治疗癌症提供了新的方向。嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T cell,简称：CAR-T cell)疗法是通过提取患者体内T淋巴细胞，经过体外10至14天的培养改造，通过载体整合进入到正常T细胞基因序列，形成嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。被重新编码的T细胞就能获得特异性识别和攻击杀伤肿瘤细胞的能力，能精确杀伤肿瘤细胞，但又不会伤及正常细胞。由于是诱导、激活自体细胞，因此该疗法没有通常放、化疗的毒副反应，也没有传统治疗中出现的耐药性。

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，简称：CAR)主要由两部分构成，一端位于细胞外，能够特异性识别癌细胞表面的某一抗原；另一端位于细胞内，含有信号激活元件(如T细胞受体的Zeta链)，起传递信号激活T细胞的作用。这样表达CAR的T淋巴细胞(CAR-T细胞)就能避免T细胞受体识别靶细胞的限制，从而起到靶向癌细胞的的杀伤作用。目前，CAR-T治疗的临床试验正在迅速增长，其中大部分是对B细胞恶性肿瘤治疗的评估。不同的临床试验所采用的CD19CAR-T细胞都报道了显著的效果，复发性或难治性淋巴细胞白血病的治疗能达到60-90％的反应率，一部分患者达到持续的缓解，最长的达到2年,这种免疫治疗已经给一些患者带来了前所未有的效果。除了血液系统肿瘤外，研究者们一直在努力将CAR-T治疗扩展到实体瘤,但是，CAR-T治疗实体瘤还处于早期阶段，还有许多问题需要解决。

Mucin 1是膜结合型粘蛋白家族成员，简称MUC1。在正常情况下，MUC1呈低水平表达在乳腺，胰腺，胃肠道，呼吸道及泌尿生殖道的上皮细胞的近管腔面，不能被机体免疫系统识别，其表达特点为极性表达，顶端分布，糖基化丰富。在大多数腺癌、血液系恶性肿瘤中MUC1呈异常过表达，可通过调控多个信号通路调节细胞恶性转化，是促进肿瘤发生与发展的重要癌基因。由于MUC1在肿瘤细胞中的表达糖基化不全，并失去极性，遍布于整个细胞表面，容易被抗体识别，因此，MUC1蛋白可作为CAR-T细胞抗肿瘤治疗的一个理想靶点。

发明内容

本发明提供一种Anti MUC1 CAR-T细胞及其制备方法和应用，该细胞经过T细胞修饰和改造得到，并且能够特异性识别和杀伤腺癌、血液系恶性肿瘤，适用于相应肿瘤疾病的预防和治疗。

本发明提供一种Anti MUC1 CAR-T细胞，所述Anti MUC1 CAR-T细胞在T细胞内表达SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白；所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述SCFV用于结合所述MUC1蛋白，并且所述SCFV的氨基酸序列为第一序列，所述第一序列为：