[发明专利]一种多元生物复合驱油剂体系及其注入工艺

权利要求书

1.一种多元生物复合驱油剂体系，是由石油烃降解菌剂和生物复合驱油剂构成：

所述的石油烃降解菌剂是由1～5份的石油烃降解菌发酵原液与15～20份营养液，混合均匀制得；

所述的生物复合驱油剂是由下列组分按重量比制成：生物聚合物菌发酵原液5～10份、生物脂肽表面活性剂10～20份、甜菜碱1～5份，水60～80份；

所述的营养液是由玉米糖浆与蔗糖按3：1质量配比的混合液0.5～5份、磷酸氢二铵0.1～0.5份、硝酸钠0.1～0.5份，腐殖酸钾盐0.02～0.05份，水60～80份；

以上均为质量份数。

2.如权利要求1所述的一种多元生物复合驱油剂体系，其特征在于所述的石油烃降解菌发酵原液的制备方法如下：

A、菌种诱变：将地衣芽孢杆菌CGMCC1.7461接种过夜培养，制得待诱变发酵液，然后将待诱变发酵液进行600～750微克/毫升NTG处理，按照1:1进行混匀，25℃保温30min，离心取下层细胞，洗涤细胞，于LB培养基中重悬、其细胞浓度为1.0×10⁸～2.0×10⁸个/ml，25℃培养过夜，稀释涂板，选择能够在10℃～25℃温度条件下，利用正十六烷、苯、菲和环己烷为单一碳源生长、对芳烃及环烷烃有较强的降解能力的菌种即为目标菌种；

B、发酵液制备：

a、目标菌种活化：斜面目标菌种挑出2环至含300ml液体培养基的500ml摇瓶中活化培养，温度25±2℃、100转/分震荡培养18～24小时，制得活化菌液；

b、制备种子液：将a步骤制得的摇瓶菌液转接到5L摇瓶中培养，5L摇瓶装液量60%，接种量5%，温度25±2℃、100转/分震荡培养24～30小时，得到种子菌液；

c、初级发酵培养：将b步骤制得的种子菌液导入一级种子发酵罐中，种子罐装液量80%，接种量5%，搅拌转速100转/分，pH值控制在7.0～8.0，温度25±2℃，培养24～36小时后，制得初级发酵液；

d、发酵培养：将c步骤制得的初级发酵液导入三级发酵罐，三级发酵罐按60%装液量，接种量5%，过程pH值控制在7.0～8.5，温度25±2℃，搅拌速度80转/分，培养30～48小时后，制得石油烃降解菌发酵原液；

上述摇瓶及各级发酵罐培养基配方是：液态石蜡0.5～1份、氯化铵2～3份、磷酸二氢钾1.5～2份、七水硫酸镁0.5～1份、氯化锰0.1～0.5份、氯化钙0.2～0.5份、装液量控制在60～80%；

以上均为质量份数、质量百分比和质量比。

3.如权利要求1所述的一种多元生物复合驱油剂体系，其特征在于所述的生物聚合物菌发酵原液是通过如下方法制得的：

A、菌种诱变：将野油菜黄单胞菌CGMCC1.1781接种过夜培养，制得待诱变发酵液，然后将待诱变发酵液进行600～750微克/毫升NTG处理，按照1:1进行混匀，25℃保温30min，离心取下层细胞，洗涤细胞，于LB培养基中重悬、其细胞浓度为1.0×10⁸～2.0×10⁸个/ml，25℃培养过夜，稀释涂板，筛选驯化后选择能够在20～50℃温度下，利用糖类为碳源产生黄原胶的菌种即为目标菌种；

B、发酵液制备：

a、目标菌种活化：斜面目标菌种挑出2环至含100ml液体培养基的500ml摇瓶中活化培养，温度25±2℃、150转/分震荡培养10～15小时，制得活化菌液；

b、制备种子液：将a步骤制得的活化菌液转接到5L摇瓶中培养，5L摇瓶装液量20%，接种量10%，温度25±2℃、150转/分震荡培养10～15小时，得到种子菌液；

c、一级发酵培养：将b步骤制得的种子菌液导入一级种子发酵罐中，种子罐装液量50%，接种量10%，控制通风量0.5vvm，搅拌转速130转/分，pH值控制在7.0～8.0，温度25±2℃，培养8～13小时后，制得一级发酵菌液；

d、二级发酵培养：将c步骤制得的一级发酵菌液导入二级种子罐，二级罐装液量50%，接种量10%，控制通风量0.5～0.6vvm，搅拌转速100转/分，pH值控制在7.0～8.0，温度25±2℃，培养8～13小时后，得到二级发酵菌液；

e、发酵培养：将d步骤制得的二级发酵菌液导入三级发酵罐，三级发酵罐按50%装液量，接种量10%，通风量0.7～0.8vvm，过程pH值控制在7.0～8.5，温度25±2℃，搅拌速度80转/分，培养7～10小时后，将发酵液导入相同体积发酵罐中按相同工艺参数，分别继续发酵生产，发酵15～20小时后，制得生物聚合物菌发酵原液；

上述摇瓶及各级发酵罐培养基配方是：玉米糖浆与蔗糖按3：1质量配比的混合液10～20份、酵母膏5～7份、蛋白胨0.2～0.3份、磷酸二氢钾1.5～2份、七水硫酸镁0.3～0.5份、氯化钙0.1～0.2份、装液量控制在20～50%、培养温度25±2℃，pH值7～8，搅拌速度控制在80～150rpm；

以上均为质量份数、质量百分比和质量比。