[发明专利]ZEB2基因表达变异在胰腺癌化疗预后诊断中的应用

说明书

本发明通过检测ZEB2基因的表达情况针对胰腺癌治疗患者进行预后，具有较好的预测效果，为后期进一步的治疗提供初步的指导。同时本发明提供了一种阻断ZEB2基因表达的siRNA，具有较好的抑制ZEB2基因表达的效果。本发明具有较好的抑制效果以及应用前景。

技术领域

本发明涉及ZEB2基因在制备胰腺癌诊断和/或预后试剂盒中的用途以及ZEB2阻断剂在制备治疗胰腺癌药物中的用途，属于医药生物技术领域。

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90％为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1％，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率很低。本病发病率男性高于女性，男女之比为1.5～2:1，男性患者远较绝经前的妇女多见，绝经后妇女的发病率与男性相仿。胰腺癌因其恶性程度高，早期诊断困难，预后差成为肿瘤病学的一大挑战。尽管目前临床上将小于2cm的胰腺癌视为早期癌，但此时约有3 0％～4 0％的患者已有淋巴结转移。因此，仅根据肿瘤大小对胰腺癌分期有其局限性。关于胰腺癌的高危因素与胰腺癌发病间的关系尚有争议，但对这些人群宜定期B超检查。出现胰腺癌的警报症状，如消瘦、腹泻、消化不良等应高度疑诊胰腺癌。

目前常规的胰腺癌诊断方法包括影像学诊断，比如B超、CT等。肿瘤标志物反映了癌的发生、发展过程及基因激活程度，可在肿瘤宿主的组织、体液及排泄物中检出。有多种胰腺癌肿瘤标志物已用于临床，但其敏感性、特异性尚不理想。常见的标志物癌胚抗原(CEA)：在胰腺癌患者血清中有较高的表达率，但其特异性低，其增高也见于肝、结直肠、胃、胆囊癌及非消化道癌。因而限制了其应用价值。另外一个标志物CA19-9：是目前公认的胰腺癌相关肿瘤标志物，常作为标准标志物来判断其他肿瘤标志物对胰腺癌诊断的实用价值，目前巳广泛用于临床。CA19-9诊断胰腺癌的敏感性为69％～93％，特异性为81％～85％。对高危患者可用CA19-9作为筛选检查，其结果优于CEA。除胆管癌外，与其他消化道恶性肿瘤均有良好的鉴别诊断意义，而且对早期胰腺癌的诊断亦有一定价值，但是诊断效果还有改进的空间。

ZEB2基因在现有技术中分别与其它的小分子一起在乳腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、宫颈癌和鼻咽癌中均有一定的指示作用，但是在胰腺癌中还没有相关报道。特别是在胰腺癌化疗预后诊断中的应用还没有涉及。

发明内容

ZEB2基因表达水平预测胰腺癌患者预后的标志物用途，基于ZEB2基因表达水平可以预测胰腺癌患者的预后，ZEB2表达水平低的患者预后好，表达水平高的患者预后差。

基于ZEB2基因表达水平预测胰腺癌患者预后的检测及应用方法，a.提取肿瘤患者原发癌组织标本的细胞总RNA；以RNA为模板逆转录合成cDNA；以cDNA为模板，用ZEB2基因和管家基因的特异性引物和荧光标记探针进行实时定量PCR扩增，计算ZEB2基因mRNA的相对表达量；b.根据胰腺癌患者复发转移阳性病例和复发转移阴性病例的ZEB2mRNA表达量，确定预后判断的临界值。

ZEB2mRNA表达量低于临界值的患者预后好，而高于临界值的患者预后差。

所述的检测方法，以原发癌组织中ZEB2mRNA表达量对肿瘤患者预后判断，表达量低的患者则判断为预后好，表达量低高的则判断为预后差。

本发明通过研宄证实ZEB2可应用于诊断胰腺癌治疗效果的指标预测预后；ZEB2可作为胰腺癌治疗新药和生物免疫治疗的新靶点。阻断ZEB2表达可抑制胰腺肿瘤生长，抑制胰腺肿瘤细胞，可作为胰腺癌治疗新药和生物免疫治疗的新靶点。

另外，本发明提供一种特异性抑制ZEB2基因表达的siRNA，其序列如SEQ ID NO：1和2所示。

另外，本发明提供一种基因干扰慢病毒载体，为将编码特异性抑制ZEB2基因表达的干扰小分子RNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，能产生人ZEB2基因小分子干扰RNA。