[发明专利]一种多肽在制备Kv2.1通道工具试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种活性多肽在离子通道工具试剂中的用途，尤其是用化学法制备的广西缨毛蛛毒素提取物-蜘蛛抑钾肽-XI（简写为SPKP-XI）在制备电压门控钾通道工具试剂-KV2.1型钾通道抑制剂中的用途。

背景技术

电压门控钾通道广泛分布于神经元、心肌、血管平滑肌、胰腺、骨骼肌等可兴奋性组织中，是一种重要的跨膜结构蛋白，其参与调节神经递质的分泌、血管收缩、胰腺分泌和骨骼肌兴奋性等多种生理过程,同时也是治疗药物作用的重要靶标之一。钾通道在动作电位的产生和传播过程中的关键性作用，电压门控钾通道成为很多动植物毒素的作用靶标。钾离子通道的结构与功能关系研究已经成为国际上的研究热点。电压门控钾通道很可能成为神经性和心血管等疾病的重要治疗靶点。自然界的动物毒素是一类具有很高实用价值和应用前景的工具试剂或药物导向物质，不仅是有毒动物抵御天敌的有力武器，也是从事神经生物学和生理学研究、天然创新药物开发以及蛋白质基础研究的宝贵材料,同时也是研究离子通道的独特“分子探针和解密器”。迄今为止，从多种动物（如蝎、蜘蛛、蛇以及海洋动物等）的毒液中鉴定到了很多作用于钾通道的活性成分。它们通过与钾通道的不同位置相结合从而引起通道的动力学特征发生相应的变化，如通道去失活、阻塞通道口、易化激活、失活延缓等。通过阐述这些特异性调制剂作用于钾通道的分子机制，除了在理论上可深入推测钾通道亚型之间的功能活动区别和门控活动机制外，还可以为将它们开发成治疗人类相关疾病的新药提供充分的理论基础和广阔的应用前景。

发明内容

本发明旨在于提供一种广西缨毛蛛毒素提取物-蜘蛛抑钾肽-XI在制备电压门控钾通道工具试剂-KV2.1型钾通道抑制剂中的应用，所述的广西缨毛蛛毒素提取物-蜘蛛抑钾肽-XI（简写为SPKP-XI），其氨基酸序列为：

NH2-Glu Cys Arg Lys Met Phe Gly Gly Cys Ser Val Asp Ser Asp Cys Cys Ala His Leu Gly Cys Lys Pro Thr Leu Lys Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Thr Phe-NH2

其特征在于广西缨毛蛛毒素提取物-蜘蛛抑钾肽-XI作为单一有效活性组份用于制备KV2.1型钾通道抑制剂。

蜘蛛抑钾肽-XI作为单一有效活性组分用于制备KV2.1型钾通道抑制剂。

蜘蛛抑钾肽-XI制备成细胞外给药的KV2.1型钾通道工具试剂。

蜘蛛抑钾肽-XI在制备KV2.1型钾通道工具试剂或抑制剂时，配制细胞外给药的剂量为5 µmol/L。

蜘蛛抑钾肽-XI的半数有效作用剂量IC50为0.74 µmol/L。

蜘蛛抑钠肽-IX的作用是时间依从的。

附图说明

图1是5 µmol/L SPKP-XI对KV2.1型钾通道的影响。

图2是SPKP-XI作用于KV2.1钾通道的浓度-效应关系曲线。

图3是SPKP-XI作用于KV2.1钾通道的时间-效应关系曲线。

图4是SPKP-XI对KV2.1钾通道电流-电压关系的影响。

具体实施方式

为了更好的理解和更充分公开本发明，下面将通过细胞外给药途径，采用爪蟾卵母细胞模型来说明蜘蛛抑钾肽-XI的KV2.1型钾通道抑制作用。

1、实验材料和方法

1.1质粒的线性化及回收