[发明专利]一种造血干细胞培养基

权利要求书

1.一种造血干细胞培养基，其特征在于：包括基础培养基和添加于基础培养基中的添加剂，按终浓度计，所述添加剂包括以下含量的组分：FBS 100-200mg/mL、亚硒酸钠0.02-0.03μmol/mL、卡介菌多糖核酸5-10mg/mL、千金藤素50-100μmol/mL、海藻糖50-100ng/mL、维生素 C 40-80ng/mL、第一细胞因子缓释微囊1.5-2.5mg / mL、第二细胞因子缓释微囊25-50mg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述第一细胞因子缓释微囊的制备方法包括以下步骤：

A、将IL-3、IL-6、GM-CSF、聚乙二醇加入预先添加有甘露醇和硫酸锌的水溶液中，搅拌均匀后，得到混合物A，所述混合物A中IL-3、IL-6、GM-CSF的浓度均为1-2wt％，聚乙二醇的浓度为6-10 wt％；

B、将聚羟基乙酸- 聚乳酸- 聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，搅拌均匀后，得到混合物B， 所述混合物B中聚羟基乙酸- 聚乳酸- 聚乙二醇的浓度为12-18wt％；

C、将混合物A 加入到混合物B 中，搅拌均匀后，得到混合物C，所述混合物A和混合物B的体积比为1:1-2；

D、将聚乙烯醇、壳聚糖和氯化钠加入水中，搅拌均匀后，得到混合物D；所述混合物D中聚乙烯醇的浓度为1-2 wt %，壳聚糖的浓度为0.5-1 wt %，氯化钠的浓度为1-2 wt %；

E、将混合物C加入混合物D中，搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离心分离、真空冷冻干燥，制得第一细胞因子缓释微囊。

3.根据权利要求2所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述第一细胞因子缓释微囊的粒径为50-90μm。

4.根据权利要求3所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述聚乙烯醇由质量比为1:0.5-2的无规聚乙烯醇和间规聚乙烯组成。

5.根据权利要求5所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述无规聚乙烯醇的聚合度为600-1000，所述间规聚乙烯的聚合度为1800-2500。

6.根据权利要求2所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述混合物A中，所述甘露醇的浓度为2-4 wt％，碳酸锌的浓度为1-3 wt％。

7.根据权利要求1所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述第二细胞因子缓释微囊的制备方法包括以下步骤：

S1、将干细胞因子、FMS样酪氨酸激酶-3配体、聚乙二醇加入预先添加有葡聚糖和季戊四醇锌盐的水溶液，搅拌均匀后，得到混合物Ⅰ，所述混合物A中干细胞因子的浓度为2-4wt％，FMS样酪氨酸激酶-3配体的浓度为2-4wt％、聚乙二醇的浓度为4-8wt％；

S2、将聚乳酸- 聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，搅拌均匀后，得到混合物Ⅱ， 所述混合物Ⅱ中聚乳酸-聚乙二醇的浓度为13-20wt％；

S3、将混合物Ⅰ加入到混合物Ⅱ 中，搅拌均匀后，得到混合物Ⅲ ，所述混合物Ⅰ和混合物Ⅱ的体积比为1:1-2；

S4、将聚乙烯醇、壳聚糖和海藻酸钠加入水中，搅拌均匀后，得到混合物Ⅳ；所述混合物Ⅳ中聚乙烯醇的浓度为1-2 wt %，壳聚糖的浓度为0.5-1 wt %，海藻酸钠的浓度为2-4 wt %；

S5、将混合物Ⅲ加入混合物Ⅳ中，搅拌进行溶剂挥发，经洗涤、离心分离、真空冷冻干燥，制得第二细胞因子缓释微囊。

8.根据权利要求7所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述第二细胞因子缓释微囊的粒径为60-100μm。

9.根据权利要求7所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：优选地，所述混合物Ⅰ中，所述葡聚糖的浓度为4-6 wt％，季戊四醇锌盐的浓度为2-4 wt％。

10.根据权利要求1所述的一种造血干细胞培养基，其特征在于：所述基础培养基为DMEM培养基。