[发明专利]一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623及其制备方法

说明书

本发明涉及一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623及其制备方法，所述马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623为SEZ HP0623重组蛋白，由429个氨基酸残基组成，分子量为47.04kDa；所述制备方法包括基因克隆、酶切酶连、诱导表达、蛋白纯化；所述HP0623可用于疫苗的制备。本发明所述马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623在小鼠实验中表现出良好的免疫反应原性，产生的抗体能提供较强保护力，诱导高水平的杀菌能力，马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623位于SEZ表面，rHP0623可以抑制SEZ对Hep‑2细胞的粘附。

技术领域

本发明涉及链球菌保护性抗原，具体为一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623及其制备方法。

背景技术

链球菌病是一种极为常见的动物致病菌，根据群特异性抗原可以将其分为20个群，从A～V，缺I和J。动物病原菌以B群链球菌(Group B Streptococci,GBS)和C群链球菌(Group C Streptococci,GCS)较多，而人的致病菌则多为A群链球菌(GroupAStreptococci,GAS)。

马链球菌兽疫亚种(Streptococcus zooepidemicus,SEZ)属于兰氏分群的C群链球菌，无宿主专嗜性，易发生变异，来源不同的菌株抗原性可能不同。该菌可以经消化道、手术、外伤、注射疫苗和外伤等途径感染动物，从而引起动物的败血症、关节炎、乳房炎、脑膜炎和心内膜炎等动物疫病。人则可能通过与患病动物密切接触或食用该菌污染的食物而引发该病的感染。青霉素和阿莫西林等抗生素一直被用于预防和治疗此病，但由于抗生素的大量使用，导致该菌耐药性的产生和动物制品中抗生素的残留等问题。因此，采用疫苗来防治该病才能够从根本上解决这些问题。但是由于灭活的全菌疫苗常会引起免疫综合症等副作用，因此需要研发新型的亚单位蛋白疫苗来预防该类疾病的发生。细胞表面锚定的糖结合蛋白(HP0623)是马链球菌兽疫亚种细胞表面的一种新发现的保护性抗原，其主要作用于宿主细胞，因此有望被开发为防治SEZ的亚单位疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623及其制备方法，所述一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623能有效用于防治马链球菌兽疫亚种。

本发明的技术方案为：

一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623，所述HP0623重组蛋白为SEZ HP0623重组蛋白(rHP0623)，由sez_0623基因编码，由429个氨基酸残基组成，分子量为47.04kDa，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原HP0623的制备方法，包含以下步骤：

1)PCR扩增：使用马链球菌兽疫亚种SEZ C55138株基因组为模板，用引物进行PCR扩增；

2)与载体连接：PCR产物经限制性内切酶酶切后与经相同酶酶切的pET-32a载体连接；所述的限制性内切酶为BamH I和Hind III；

3)转化和诱导：将上述连接好的载体转化进入大肠杆菌(E.coli BL21)后，置于37℃摇床培养，待其OD值为0.6～1.0时，加入IPTG诱导3-5h；

4)纯化：离心收集菌体，经PBS重悬后，高压破碎后离心收集上清，将上清液的目的蛋白经过Ni-NTA层析柱进行纯化获得纯化的HP0623重组蛋白。

所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物各有1个酶切位点。

进一步地，所述引物为：

正向引物(SEQ ID NO.3)：5’-CCCGGATCCGCTTGCCTGCTAGTG-3’，划线部分为BamH I酶切位点；