[发明专利]降低含人工合成抗菌药水体中生物毒性的方法

说明书

本发明公开了一种降低含人工合成抗菌药水体中生物毒性的方法，包括如下步骤：(1)种子培养：将黄孢原毛平革菌培养得一级种子；将血红密孔菌培养得一级种子；(2)将含人工合成抗菌药的水体与发酵培养基混合配成降解液；(3)取黄孢原毛平革菌和血红密孔菌一级种子离心，弃上清，放入降解液中，发酵，离心，收集上清；(4)将步骤(3)得上清与Luria‑Bertani培养基混合，接入大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，监测大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在24h内OD₆₀₀变化，OD₆₀₀与含人工合成抗菌药水体中生物毒性成反比。本发明的方法用黄孢原毛平革菌和血红密孔菌混合培养降解含人工合成抗菌药水体，降低该水体生物毒性的效果好。

技术领域

本发明属于环境污染治理领域，涉及一种降低含人工合成抗菌药水体中生物毒性的方法。

背景技术

以磺胺甲恶唑(SMX)、诺氟沙星(NOR)为代表的磺胺类和氟喹诺酮类药物近年来被广泛使用，它们不仅用于治疗人类和兽类疾病，还作为饲料添加剂用于畜牧业以及水产养殖业。磺胺甲恶唑(SMX)和诺氟沙星(NOR)不能被人类和兽类完全代谢，因此大部分以母体或代谢物的形式通过尿液或者粪便排出体外，继而重新进入水体环境中。水体环境中的磺胺甲恶唑(SMX)和诺氟沙星(NOR)会导致抗性基因的形成与传播，从而威胁公众健康，因此亟待寻求有效的方法从水体环境中去除这些药物。物理方法例如光解、光催化虽能移除磺胺甲恶唑(SMX)和诺氟沙星(NOR)但会造成二次污染，同时物理方法费用也较高。

近年来，白腐真菌在生物修复异生物质污染方面引起了广泛的关注。单一白腐真菌虽能达到移除异生物质的能力，但自然环境中混菌体系普遍存在。污染物的移除可能不是一种微生物而是两种乃至三种以上微生物共同作用的结果。水体环境中的磺胺甲恶唑(SMX)和诺氟沙星(NOR)会抑制水体中正常存在的微生物的生长，即对微生物具有生物毒性。磺胺甲恶唑(SMX)和诺氟沙星(NOR)在去除过程中会产生一些毒性更大的转化产物，对水体中正常存在的微生物可能毒性更大，即使去除了水体中这些污染物但对环境造成了更大的污染，因此以水体中正常存在的微生物为指示菌来评估磺胺甲恶唑(SMX)和诺氟沙星(NOR)去除后水体中的生物毒性是必要的。既能有效的去除污染物又能更好的减少污染物的生物毒性才能实现环境污染治理领域的双赢。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术可能会形成二次污染以及较大生物毒性的不足，提供一种降低含人工合成抗菌药水体中生物毒性的方法。

本发明的技术方案概述如下：

降低含人工合成抗菌药水体中生物毒性的方法，包括如下步骤：

(1)种子培养：将保藏编号为CGMCC 5.776的黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)在马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基中，在28-35℃培养4-6天；再转入马铃薯葡萄糖琼脂液体培养基中在28-35℃，在搅拌下，培养45-50小时，得到黄孢原毛平革菌一级种子；

将保藏编号为CGMCC 5.815的血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)在马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基中，在28-35℃培养5-7天；再转入马铃薯葡萄糖琼脂液体培养基中在28-35℃，在搅拌下，培养45-50小时，得到血红密孔菌一级种子；

(2)降解液配制：将含人工合成抗菌药的水体与发酵培养基混合配成降解液，使降解液中人工合成抗菌药的浓度在2-10mg/L；

(3)按比例，取步骤(1)获得的黄孢原毛平革菌的一级种子15-25mL干重条件下的浓度为0.09-0.15g/L和血红密孔菌的一级种子15-25mL干重条件下的浓度为0.09-0.15g/L，在6000-8000rpm离心10-15min，弃上清，放入降解液中，使总体积为500mL，在28-35℃，150-200rpm，混合发酵180-200h，6000-8000rpm离心，收集上清；