[发明专利]基因芯片杂交组件、包含该杂交组件的试剂盒、其应用及杂交检测方法

说明书

本发明公开了一种针对于不同GC％含量的基因芯片杂交组件。其包括至少两种探针和杂交溶液；其中，所述芯片上探针序列GC％含量范围在10％‑80％；所述杂交溶液包含样品片段、甜菜碱和Zn²⁺。利用本发明基因芯片杂交组件能够使不同GC％含量的DNA片段在同一个条件下进行杂交，并可消除非特异性杂交的信号。

技术领域

本发明涉及基因芯片杂交组件，更详细地说，本发明涉及一种针对于不同GC％含量DNA序列进行检测的基因芯片杂交组件。

背景技术

基因芯片为一种生物芯片，已广泛用于基因测序、基因诊断等。其中，基因诊断已作为一种重要的医学方法来预测疾病、指导用药。

基因诊断的原理是在载体上固定上寡核苷酸探针，并将靶DNA片段与之杂交显色，来判断特定的DNA片段中其碱基是否存在突变。在高通量基因芯片检测过程中，现有技术常通过调节探针长度及探针GC含量来统一杂交温度，确保基因芯片杂交信号的稳定。但随着基因芯片通量的上升，该方法的难度呈指数增长，并且该方法无法解决所有高通量基因芯片杂交温度问题。

由于不同GC％含量的DNA片段其在基因芯片上的杂交温度不一样，现有技术中在同一张芯片上通常只能检测一种DNA序列或者几种GC％含量相近的DNA序列，而无法在同一张芯片上检测GC％含量有一定差异的不同DNA序列。

发明内容

为解决上述的不同GC％含量的DNA片段难以在同一张芯片上杂交的技术问题，本发明提供一种基因芯片杂交组件。

本发明基因芯片杂交组件，包括至少两种具有不同GC％含量的探针和杂交溶液；其中，所述探针序列的GC％含量范围在10％-80％；所述杂交溶液包含甜菜碱和Zn²⁺。基于基因芯片杂交的目的，本发明通过杂交溶液提供目的片段，用于与固定在基因芯片上的探针杂交结合。利用本发明基因芯片杂交组件，可对包含有与探针进行互补配对的DNA序列进行检测，对样品进行基因型判断。

本发明基因芯片杂交组件中探针序列的GC％含量范围在10％-80％，亦如本发明下文实验结果所揭示的，探针序列之间GC％含量的差异范围可为0％～70％。优选地，探针序列之间GC％含量的差异范围在20％～65％。可选地例如，探针序列之间GC％含量的差异为20％、30％、35％、45％和65％。

其中，所述杂交溶液主要包括预杂交液、显色液、抗体抗稀、杂交缓冲液和洗液；其中，所述杂交缓冲液包括缓冲盐溶液、靶序列、甜菜碱和Zn²⁺，pH值范围在7.0-7.5。其中，靶序列是指由样品片段提供的DNA片段的序列，对于样品片段仅需满足能够与探针进行互补配对的原则即可。

其中，所述甜菜碱浓度范围1.5M～2.5M，所述Zn²⁺浓度范围10^-4M～10^-2M。优选地，所述甜菜碱浓度为2.5M，所述Zn²⁺浓度为10^-3M。

其中，所述探针序列片段长度在20bp左右，样品片段长度在100bp左右。

其中，杂交温度为31℃。

其中，所述探针序列任意选自包含以下的组：

SEQ ID NO.5:5’-atggcccaggcccagccgcg-3’

SEQ ID NO.7:5’-acatgcagagacccagcaat-3’

SEQ ID NO.9:5’-aattttgagtctttttaaaa-3’

SEQ ID NO.4:5’-atggcccaggtccagccgcg-3’

SEQ ID NO.6:5’-acatgcagaggcccagcaat-3’