[发明专利]一种富含花青素黑色马铃薯的育种方法

权利要求书

1.一种富含花青素黑色马铃薯的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、G0杂交：选用综合性状优良的紫马铃薯株系ACP1704和紫皮紫肉马铃薯株系ACP1661作亲本材料进行品种间杂交，构建富含花青素功能性黑马铃薯育种群体；

步骤2、G1杂交当代进行单株薯块颜色筛选，筛选出薯颜色深，全紫全黑，形状好的优势组合；

步骤3、G2低世代多点多地进行农艺性状选择及花青素含量及抗氧化活性筛选鉴定，按含量及活性高低及颜色深浅来筛选单株并无性繁殖，单株种植；

步骤4、G3入选单株田间综合鉴定，选择株型适中，结薯性好，产量高，颜色好，品质优良，综合性状优良的单株，进行第二年株系评选；

步骤5、G4综合评价鉴定：对入选株系/品系进行品质、花青素含量，抗氧化活性进行测定。

2.根据权利要求1所述的富含花青素黑色马铃薯的育种方法，其特征在于，步骤1中采用综合性状优良的紫马铃薯株系ACP1704和紫皮紫肉马铃薯株系ACP1661作亲本材料进行杂交。

3.根据权利要求1所述的富含花青素黑色马铃薯的育种方法，其特征在于，在杂交后代中从白皮白肉、黑皮白肉、黑皮黑肉、红皮白肉、浅黑、深黑株不同类型中选育出皮色与肉色一致，薯形整齐一致的株系，其选择的株系/品系的肉色为黑皮黑肉，薯形为椭圆形，表皮光滑，呈黑紫色，乌黑发亮，富有光泽；单薯重在50g-350g；芽眼多而浅，结薯集中；单株结薯6～8个；半光生幼芽基部圆形，深黑色；顶部钝形，黑色；有茸毛；块茎休眠期中等，耐储藏。

4.如权利要求1所述的富含花青素黑色马铃薯的育种方法，其特征在于，所述的G3入选单株田间综合鉴定，具体为，选育的新品系早熟，全生育日数60-80天；株型开展、分支少；株高50-65厘米；茎淡黑色，生长势强；叶绿色，茸毛多，叶缘平展，侧小叶3-4对，排列疏密；花序总梗淡绿色，花冠极浅黑色，雄蕊黄色；花柱中等长；开花繁茂性中等；植株中抗晚疫病，块茎易感染病毒病；抗旱强，耐贫瘠；亩产2000-3000公斤。

5.如权利要求1所述的富含花青素黑色马铃薯的育种方法，其特征在于，抗氧化活性测定方法如下：

(1)总酚含量测定：马铃薯块茎切碎成小块，混匀随机称取5g样品，转移至含有25ml80％甲醇的萃取溶剂的50ml离心管中；组织捣碎机上捣碎1min，匀浆在避光条件下130rpm振荡2小时，4℃下储存；使用Millipore 1225和#3Whatman滤纸在通风橱中进行过滤；将过滤的样品储存在-20℃；取上述提取液0.1mL，用80％甲醇稀释5倍，加0.5mL 1mol/L福林-酚溶液，匀质3min，加1.25mL 75g/L碳酸钠溶液和1.75mL dH2O，避光反应45min，10 000r/min离心5min，在765nm波长处测吸光度，甲醇为对照，没食子酸为标准品；结果表示为：mg GAE/kg；

(2)花青素含量测定：将新鲜马铃薯块茎切成碎丁状，充分混匀随机称取2.5g样品，加入25ml冷的1％HCL-甲醇溶液，在组织捣碎机上捣碎1min，匀浆置于避光条件下130rpm,4℃震荡过夜，使用Millipore 1225和#3Whatman滤纸在通风橱中进行过滤后定容至50ml，溶液状提取物置于-20℃密封保存备用；取提取液3mL，在535nm和700nm处测吸光值，计算花青素含量；

(4)绿原酸含量测定：取250μl马铃薯样品的甲醇提取物，用3.75ml蒸馏水稀释，加入1ml 5％钼酸钠；室温放置1小时，测量370nm处的吸光度值；通过将2.5mg绿原酸溶于50ml甲醇中制备新鲜的绿原酸标准品；取不同体积的标准溶液并读取370nm处的吸光度值，制备标准曲线并计算马铃薯样品的总绿原酸活性；

(5)抗氧化活性测定：通过将68mg DPPH溶解在1000ml甲醇中来制备新鲜的DPPH溶液；在管中加入250μl样品的甲醇提取物，使用瓶顶分配器在每个管中加入2750μlDPPH溶液；在室温下30分钟后，在515nm下测量吸光度，以甲醇为空白对照；通过将50mg Trolox溶解在100ml甲醇中制备标准的Trolox样品；取不同体积的100,75,50,25和0μl标准trolox读取吸光度值，并制备标准曲线，计算马铃薯样品的总抗氧化活性。

6.根据权利要求5所述的富含花青素黑色马铃薯的育种方法，其特征在于，最终选育出的玫瑰系列黑色马铃薯株系；其干物质含量19.7％，淀粉含量13-15％；花青素含量为573mg/kg、多酚含量为1211mg/kg，抗氧化活性为1506mg/kg鲜重。