[发明专利]土壤尿液DNA提取试剂盒及方法

权利要求书

1.土壤尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：

(a)土壤裂解液，其组成成分包括表面活性剂、螯合剂、pH缓冲剂；

所述表面活性剂为：十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂酰基肌氨酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40、十六烷基三甲基溴化铵中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的质量浓度为1-100g/L；

所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钾中的一种或两种，所述螯合剂的浓度为1-100mmol/L；

所述pH缓冲剂为Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为7.0-11；

(b)结合液，其组成成分包括表面活性剂、离液盐、pH缓冲剂；

所述表面活性剂为：聚乙二醇辛基苯基醚、TWEEN 20、TWEEN 40、TWEEN 60、TWEEN 80、NP 40中的一种或两种及以上的混合，所述表面活性剂的质量浓度为1-100g/L；

所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸钾、高氯酸钠、碘化钾、碘化钠中的一种或两种及以上的混合，所述离液盐的浓度为3-5mol/L；

所述pH缓冲剂为Tris-HCl、Tris-醋酸、NaH2PO4-Na2HPO4、KH2PO4-K2HPO4、醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠，所述pH缓冲剂的pH值为4.5-7.0；

(c)漂洗液，所述漂洗液为70-80％乙醇；

(d)洗脱液，其组分为：10mmol/L Tris-HCl，0.1mmol/L乙二胺四乙酸二钠，pH 8.0；

(e)硅基DNA吸附材料，所述硅基DNA吸附材料为二氧化硅纳米颗粒、硅胶膜、玻璃纤维膜、石英膜、二氧化硅包裹的磁性纳米颗粒中的任意一种。

2.如权利要求1所述的土壤尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，土壤裂解液中的所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠或十二烷基磺酸钠中的一种或两种的混合，所述表面活性剂质量浓度为1-10g/L；

土壤裂解液中的所述pH缓冲剂为Tris-HCl，pH缓冲剂的pH值为7.5-8.5。

3.使用权利要求1或2所述的试剂盒提取土壤尿液DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)DNA提取

用土壤裂解液和蛋白酶K裂解含有尿液的土壤样品，离心分离土壤和上清液，上清液加入结合液，混合后加入硅基DNA吸附材料，分离硅基DNA吸附材料和液体，漂洗硅基DNA吸附材料，洗脱DNA；具体包括以下步骤：(1)刮取含有尿液的表层土壤，烘干，取100-200mg土壤样品，加入样品管中，然后加入400ul土壤裂解液和20ul蛋白酶k，震荡混匀后，75℃加热裂解15分钟；

(2)最大转速离心5分钟，将上清液转移至新的样品管中，加入800ul结合液，混匀；

(3)将上一步的混合液转移至硅基DNA吸附材料，分离液体和硅基DNA吸附材料；

(4)用漂洗液漂洗硅基DNA吸附材料；

(5)用洗脱液洗脱硅基吸附材料中的DNA；

2)PCR扩增及电泳

将上步纯化的DNA进行PCR扩增，在电泳仪中检测DNA。