[发明专利]他莫昔芬的用途以及一种构建腭裂动物模型的方法

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及他莫昔芬的用途以及一种构建腭裂动物模型的方法。本发明研究发现，♀(Tgfbr1^f/fK14Cre+)与♂(Tgfbr1^f/fK14Cre‑)交配，或♀(Tgfbr1^f/fK14Cre‑)与♂(Tgfbr1^f/fK14Cre+)小鼠交配，其胎鼠可在他莫昔芬的诱导下实现Tgfbr1基因敲除。从而实现腭裂动物模型的构建。采用本发明提供方法构建的小鼠，腭部上皮细胞中的Tgfbr1基因被敲除且可减少其他因素对腭裂模型的干扰。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及他莫昔芬的用途以及一种构建腭裂动物模型的方法。

背景技术

自从人类基因组计划完成以后，生命进入科学研究进入后基因时代，而后基因组时代的核心工作是研究基因的功能。目前，研究基因功能最有效的方法是基因打靶(基因敲除和基因敲入)技术。基因打靶技术是近年来在生命科学研究领域发展起来的一项新技术，它是在胚胎干细胞技术和同源重组技术的基础上发展起来的，可以定向操作和改变基因，然后通过观察和分析倍改变基因动物的表型来获得基因功能的信息。基因大把技术还有另外一种重要用途,制作人类疾病的动物模型。

现在研究显示，人类很多疾病是由于基因突变引起的，基因打靶技术可以精确操纵动物染色体上的基因，从而制作出同人类疾病相同表型的动物模型，这对于研究人类疾病的致病机理，特别是寻找治疗人类疾病的特效药物方面具有非常重要的实践意义。但是，传统的基因敲除会导致所有细胞该基因组缺失突变，往往引起严重的发育缺陷或者胚胎死亡，不利于发育后期基因功能的分析，而目前的选择性基因敲除成功地解决了这一难题，它可以特定时间、特定位点删除某一基因，从而更好地了解此基因的功能以及相关基因表达的变化。

腭裂是在新生儿中较为常见的先天性颅面部发育畸形，全世界范围内新生儿发病率为1/700，而在我国新生儿的发病率为1.82‰，中国是目前世界上唇腭裂患者数量最多的国家之一。腭裂的病因机理复杂，对腭裂的发病原因及其机制并不清楚。TGFBR1又称ALK5(activin receptor like kinase 5)，在大多数细胞中广泛表达，特异性响应TGF-β信号。人的ALK5蛋白由426个氨基酸组成，分子质量约为55kD。而TGF-βs是一组多肽生长因子，在多方面参与胚胎发育，从哺乳动物中鉴定出3种亚型：TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3，有70％～80％的同源性。而TGFβ亚型在哺乳动物腭发生中作为内源因子发挥重要作用。所以可以通过敲除Tgfbr1获得腭裂模型来研究腭裂发生的机制。目前已报道的Dudas等建立的K14条件敲除Tgfbr1基因的小鼠腭裂模型出现的是软腭后部腭裂表型，但Dudas的模型是在所有上皮中敲除Tgfbr1，范围较广，可能会存在有基因功能互补作用较强而减轻畸形的表现。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供他莫昔芬的用途以及一种构建腭裂动物模型的方法。本发明提供的方法能够在特定时间特异性的敲除腭部上皮细胞中的Tgfbr1基因，从而排除其他因素对腭裂模型的干扰。

本发明提供了他莫昔芬在制备敲除Tgfbr1基因的制剂中的应用。

本发明具体实施例中，所述Tgfbr1基因为腭部上皮细胞中的Tgfbr1基因。

人类角蛋白14(K14)启动子作为哺乳类动物绒毛结构蛋白，与角蛋白5成对表达于转基因小鼠核分裂活跃的表皮基底层细胞、绒毛及毛囊外根鞘细胞内，是复层鳞状上皮的生物标记物。本发明将Cre重组酶置于K14启动子的调控之下，以他莫昔芬启动Cre重组酶的表达，从而使Tgfbr1基因在小鼠上皮中敲除。

本发明还提供了他莫昔芬在制备构建腭裂表型动物的制剂中的应用。

在一些实施例中，腭裂表型动物为鼠。具体的，腭裂表型动物为小鼠。