[发明专利]CD44‑shRNA/PEG‑MZF‑NPs复合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学及基因工程技术领域，具体涉及一种CD44-shRNA/PEG-MZF-NPs复合物及其制备方法和应用。

背景技术

卵巢癌是女性生殖系统中最常见的肿瘤之一，恶性程度很高，死亡率占妇科肿瘤的首位。由于卵巢癌在早期症状往往不明显，不易早期发现，超过70％的患者就诊时已为中晚期，5年生存率仅为25％。目前对卵巢癌的早期诊断尚缺乏特异有效的方法或手段。卵巢癌的治疗目前主要以手术治疗后辅以化疗，但是常规化疗副作用较大，且手术后复发率和转移率较高。因此，探索卵巢癌新型高效的早期诊断手段和治疗方法意义重大。将多种手段有机结合对卵巢癌进行联合靶向诊疗已成为重要的研究方向。基因治疗已成为继肿瘤传统手术、放疗、化疗后又一种新的治疗手段，在肿瘤治疗领域显示了较好的应用前景。肿瘤热疗是通过热能杀死肿瘤细胞，不仅可以独立应用，还可以增强放化疗的敏感性。随着纳米技术的发展，将纳米技术应用于肿瘤的治疗也日益受到关注。若能以磁性纳米材料为载体，将基因治疗与热疗有机结合，互补协同，有可能形成一种新的肿瘤联合治疗方法。

粘附分子CD44是细胞膜表面的一种跨膜糖蛋白，作为一种重要的透明质酸受体(HA)，与细胞粘附、增殖、分化和迁移有关。CD44的异常表达在肿瘤的发生、发展、转移以及预后的评估中扮演着重要角色，尤其是卵巢癌组织，CD44表达率高达96.92％。研究表明：CD44表达高的卵巢癌患者，其临床表现较重且TNM分期亦较高。高水平的CD44表达与卵巢癌患者的预后不良有关。CD44可作为卵巢癌患者病理诊断和预后预测的有效指标。因此，CD44有可能成为治疗卵巢癌的新靶点。

基因治疗是将外源性基因或者基因片段转运至靶细胞中，对靶基因进行干预的治疗方法。目前基因治疗方法被相继运用于多种肿瘤治疗研究中，其中RNAi(RNA interference RNA干扰)技术在肿瘤治疗领域显示了较好的应用前景，该技术是利用双链RNA在细胞内Dicer内切酶的识别、结合、酶切下产生有活性的长度为21-23bp的小干扰RNA(siRNA)高效特异性地降解细胞内同源mRNA，阻断目标基因，从而产生基因沉默效应，抑制目标基因活性。采用RNAi进行卵巢癌靶向治疗，获得了较好的治疗效果。

高效、稳定地进行基因转移是进行基因治疗的关键。伴随着纳米技术的发展，以纳米颗粒为基因转移载体得到广泛研究。纳米颗粒较易被修饰，具有良好的生物相容性和较少的免疫应答，很容易进入组织与细胞表面特异性受体结合，或者被靶细胞吞噬进入细胞内，实现基因的转运，并在细胞内释放，具有较高的基因转移效率。因此，纳米载体成为极具应用前景的新型载体系统。

磁性纳米颗粒作为纳米材料的一种，除了具有一般纳米载体的功能外，由于其具有特殊的磁学性质，可被应用于磁共振成像。磁性纳米材料在外加磁场的作用下产生和周围组织不同的磁场敏感性，使T1和T2磁共振成像的弛豫时间发生变化。磁性纳米颗粒在交变磁场的作用下能够产生热效应，热能不仅能增加化疗药物的功能，还可以对肿瘤细胞进行靶向热疗。其中金属氧化物颗粒Fe₃O₄是应用较多的磁性纳米粒子。在纳米氧化铁结构中加入锰、锌等金属元素可以制备成各种铁氧体，其中Mn_0.6Zn_0.4Fe₂O₄不仅具有载体、热疗的功能，还具有自动控温和恒温的特征。

基于卵巢癌CD44基因高表达的特性，以及磁性纳米粒靶向基因治疗、单纯磁流体热疗在肿瘤治疗研究方面都显示了良好的效果，前景广泛，但作用仍显单一，在肿瘤联合治疗原则的指导下，本研究设想：以Mn_0.6Zn_0.4Fe₂O₄纳米粒作为基因转移载体，利用其优良的磁响应性和有效升温控温的效果，将CD44-shRNA基因治疗磁流体热疗有机结合，优势互补，有可能形成一种联合靶向诊疗卵巢癌的新方法。

发明内容

为了解决现有基因治疗存在的问题，本发明提供一种以PEG修饰的Mn_0.6Zn_0.4Fe₂O₄纳米粒(PEG-MZF-NPs)为载体的携载CD44-shRNA抗肿瘤基因的复合物及其制备方法，该复合物在外加磁场作用下，可以将CD44-shRNA基因治疗与磁流体热疗有机结合，优势互补，对肿瘤进行靶向治疗，有效解决了现有技术的问题。