[发明专利]色氨酸衰减子突变体及其应用以及解除色氨酸衰减子反馈阻遏的方法

说明书

本发明公开了一种色氨酸衰减子突变体及其应用以及解除色氨酸衰减子反馈阻遏的方法。本发明提供的色氨酸衰减子突变体，为序列2第n1‑n2位核苷酸所示DNA分子；115≤n1≤122，135≤n2≤186。本发明还保护解除衰减调控的色氨酸操纵子基因，是将色氨酸操纵子基因中的色氨酸衰减子第1至n3位核苷酸去除后得到的DNA分子；114≤n3≤121。本发明还保护一种解除微生物中色氨酸操纵子反馈阻遏的方法，删除微生物的色氨酸操纵子基因中从色氨酸衰减子第1位开始计数的第1至n3位核苷酸。采用本发明提供的方案，可以显著提高色氨酸及其衍生物产量，对于色氨酸及其衍生物的生产领域具有极其重大的应用推广价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种色氨酸衰减子突变体、基于该色氨酸衰减子突变体创制的工程菌和工程菌的应用，还涉及及高效解除色氨酸衰减子反馈阻遏的方法。

背景技术

L-色氨酸(L-Tryptophan)是含有吲哚基的芳香族氨基酸，是人和动物的必需氨基酸之一，广泛应用于食品、医药和饲料等行业。在医药行业，色氨酸可作为氨基酸注射液和药品，用于治疗抑郁症、提高睡眠质量、抗高血压及镇痛等。在食品行业，色氨酸作为添加剂可以提高机体对蛋白的利用效率。在饲料行业，色氨酸是安全型饲料添加剂，可以调节动物饲料的氨基酸的平衡，促进家禽家畜生长。L-色氨酸还可以衍生合成羟基色胺、烟酸、辅酶、吲哚乙酸、色素和生物碱等重要的生理活性物质，色氨酸衍生物具有广泛的应用市场。

生物合成氨基酸(如L-色氨酸、L-苏氨酸、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-组氨酸等)的操纵子存在衰减调节机制。当胞内特定氨基酸浓度较高时，氨基酸操纵子的转录提前终止。相反地，当胞内特定氨基酸缺乏时，RNA聚合酶转录氨基酸操纵子。

生物法生产L-色氨酸或其衍生物的过程中，胞内L-色氨酸逐步积累，通过上述衰减调控机制反馈阻遏色氨酸操纵子的表达，不利于L-色氨酸或其衍生物的生物合成。因此，高效解除色氨酸对色氨酸操纵子的衰减调控，是生物合成L-色氨酸及其衍生物的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种色氨酸衰减子突变体、基于该色氨酸衰减子突变体创制的工程菌和工程菌的应用，还涉及及高效解除色氨酸衰减子反馈阻遏的方法。

本发明首先保护DNA分子甲(色氨酸衰减子突变体)，为如下(a1)、(a2)、(a3)、(a4)或(a5)：

(a1)序列表的序列2第n1-n2位核苷酸所示的DNA分子；n1为115以上122以下的自然数(n1优选为115)，n2为135以上186以下的自然数(n2具体可为135以上156以下的自然数或157以上186以下的自然数，更具体可为135、156或186)；

(a2)将色氨酸衰减子的第1至n3位核苷酸去除后得到的DNA分子，n3为114以上121以下的自然数(n3优选为114)；

(a3)将色氨酸衰减子相关序列的第1至n3位核苷酸去除后得到的DNA分子，n3为114以上121以下的自然数(n3优选为114)；

(a4)在(a1)或(a2)或(a3)的末端连接标签序列得到的DNA分子；

(a5)在(a1)或(a2)或(a3)的末端连接连接序列得到的DNA分子。

色氨酸衰减子突变体为色氨酸衰减子截短体或色氨酸衰减子变体。色氨酸衰减子截短体如序列表的序列2第n1-135位核苷酸所示。色氨酸衰减子变体如序列表的序列2第n1-n4位核苷酸所示，n4为136以上186以下的自然数(n4具体可为136以上156以下的自然数或157以上186以下的自然数，更具体可为156或186)。