[发明专利]一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原SZO_430及其制备方法

权利要求书

1.一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原SZO_430，其特征在于：抗原SZO_430的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原SZO_430，其特征在于：所述抗原SZO_430为SZO_430重组蛋白，且由529个氨基酸残基组成，分子量为57.35kDa；

所述抗原SZO_430由SZO_430基因编码。

3.保护如权利要求1或2所述一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原SZO_430的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、PCR扩增：使用马链球菌兽疫亚种C55138株基因组为模板，用引物进行PCR扩增；

S2、与载体连接：将步骤S1获得的PCR产物通过限制性内切酶酶切后与pET-32a载体连接；

S3、转化和诱导：将经步骤S2连接好的载体转化大肠杆菌感受态细胞BL21后，于摇床进行培养，待其进入指数生长期，加入IPTG诱导；

S4、纯化：收集步骤S3获得的细菌离心收集菌体，再用PBS重悬后破碎，离心收集上清，取上清液经Ni-NTA层析柱纯化，获得纯化的SZO_430重组蛋白，即为马链球菌兽疫亚种保护性抗原SZO_430。

4.如权利要求3所述方法，其特征在于：步骤S1中，所述引物为：

正向引物(SEQ ID NO.3)：5’-CCCGGATCCGGAGTGAAGGCGAATGA-3’，反向引物(SEQ ID NO.4)：5’-CTCAAGCTTCAACTGACCTGCTGGTTTT-3’。

5.如权利要求4所述方法，其特征在于：正向引物中划线部分为BamH I酶切位点；反向引物中划线部分为Hind III酶切位点。

6.如权利要求3所述方法，其特征在于：步骤S3中，摇床上培养温度为：26～37℃；诱导时间为：3～5h。

7.保护如权利要求1或2所述一种马链球菌兽疫亚种保护性抗原SZO_430在制备链球菌疫苗中的应用。

8.保护制备马链球菌兽疫亚种疫苗的方法，其特征在于：具体方法为：采用如权利要求1或2所述抗原SZO_430与MontanideGel 01 PR佐剂乳化后作为疫苗，疫苗中抗原SZO_430的浓度为100～200μg/mL。