[发明专利]一种快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法

权利要求书

1.一种快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品前处理：将烟叶和/或烟丝样品烘干后，粉碎，过筛，得到烟末样品；

2)配制曲霉毒素混合标准溶液和内标溶液：将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A溶于乙腈中，定容，获得曲霉毒素混合标准溶液；将内标溶于乙腈中，定容，获得内标溶液；

3)提取曲霉毒素：将步骤1)得到的烟末样品中加入步骤2)获得的所述内标溶液，然后按照以下A)步骤操作，获得待测液；

A)再加入水、乙腈和乙酸的混合溶剂对烟末样品进行振荡，然后加入QuEChERS试剂包，振荡，然后第一次离心分离，提取上清液，吹干，然后加入甲醇水溶液进行复溶，超声，然后第二次离心分离，提取上清液；

4)配制标准工作溶液：

分别称取不含有曲霉毒素的烟草粉末样品基质，然后加入一系列不同体积的所述曲霉毒素混合标准溶液以及相同体积的所述内标溶液，待溶剂挥干后，然后按照A)步骤进行操作，获得一系列不同浓度的标准工作溶液；

5)采用液相色谱-高分辨率质谱同时检测标准工作溶液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A，建立相应的标准曲线；

6)采用液相色谱-高分辨率质谱同时检测步骤3)得到的待测液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A，根据步骤5)中建立的标准曲线进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法，其特征在于，采用液相色谱-高分辨率质谱同时检测标准工作溶液或待测液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A含量的测试条件为：

反相C18毛细管液相色谱柱，柱温48-52℃，进样体积为1.5-2.5μL，进样速度为0.1μL/s，流动相A为水，流动相B由甲醇、水和甲酸按体积比(940-960)：(44-54)：(0.5-1.5)组成，流速0.05-0.15mL/min，采用梯度洗脱方式；

高分辨率质谱工作条件：正离子模式；电喷雾离子源；鞘气压力33-37psi；辅助加热器流速3单位N₂；喷雾电压3.2-3.7kV；毛细管温度290-310℃；辅助加热气温度340-360℃；平行反应监测模式采集；当m/z＝200时，分辨率为69000-71000。

3.根据权利要求1或2所述的快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法，其特征在于，在液相色谱-高分辨率质谱同时检测标准工作溶液或待测液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A的测试过程中，质谱采用平行反应监测扫描方式，黄曲霉毒素B1离子选择参数：母离子为313m/z，子离子为241.0496m/z，碰撞能量为40eV；黄曲霉毒素B2离子选择参数：母离子为315m/z，子离子为259.0601m/z，碰撞能量为35eV；黄曲霉毒素G1离子选择参数：母离子为329m/z，子离子为243.0653m/z，碰撞能量为30eV；黄曲霉毒素G2离子选择参数：母离子为331m/z，子离子为313.0704m/z，碰撞能量为30eV；赭曲霉毒素A离子选择参数：母离子为404m/z，子离子为257.0208m/z，碰撞能量为30eV；氘代黄曲霉素B1,离子选择参数；母离子为316m/z，子离子为241.0496m/z，碰撞能量为40eV；氘代赭曲霉素A离子选择参数；母离子为409m/z，子离子为257.0208m/z，碰撞能量为40eV。

4.根据权利要求1所述的快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述烘干的温度为45-55℃。

5.根据权利要求1所述的快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述内标包括d3-B1和d3-OTA，d3-B1与d3-OTA的重量比为1：1；所述内标溶液中d3-B1和d3-OTA重量浓度分别为1-400ng/mL；

和/或，在步骤2)中，在曲霉毒素混合标准溶液中，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A的重量浓度均为10-2000ng/mL。

6.根据权利要求1所述的快速测定无烟气烟草中曲霉毒素的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述水、乙腈和乙酸的混合溶剂中水、乙腈和乙酸的体积比为(95-105)：(95-105)：(0.5-1.5)。