[发明专利]人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体1F7L及其应用

说明书

本发明基于单细胞分选技术筛选获得人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体1F7L，其轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.2和SEQ ID No.5所示。该抗体具有体外中和H7N9流感病毒的能力，并能介导以NK细胞为主的效应细胞对H7N9流感病毒感染细胞的杀伤(ADCC)；该抗体可用作高致病性禽流感感染的治疗药物开发，也可用于H7N9流感病毒抗原检测试剂的开发。

技术领域

本发明涉及基因工程、单细胞分选技术及抗体文库展示技术领域，具体地说，涉及一种人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体1F7L及其应用。

背景技术

自2013年2月以来，中国东南部陆续发现了由甲型H7N9禽流感病毒引起人感染病例，由上海、安徽逐渐蔓延到全国其他省市。截至2017 年2月，全国共报道1079例H7N9流感感染，死亡病例较高。目前并无治疗该高致病型禽流感感染的特效药，而现有非特异性药物神经氨酸酶抑制剂-奥司他韦的疗效仅局限于感染早期。由于高致病性H7N9感染的前期症状与普通流感并无明显区别，大部分感染者错过最佳治疗时间而发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多器官衰竭。高致病性禽流感病毒的抗原快速、灵敏诊断需求迫切。

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的免疫球蛋白。人源单克隆抗体由于副作用小，其应用于人类疾病治疗通常不需要进行人源化，避免了此过程中的亲和力丢失。人源单克隆抗体在感染性疾病的预防和控制过程中发挥了巨大作用，其能中和病毒，还能介导效应细胞对病毒感染细胞的杀伤，其保护效果在HIV、流感病毒、MERS病毒，登革热病毒，汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等动物感染模型中得到充分的证实。

2008年以来，单个B细胞分选和抗体基因直接扩增技术成为人源抗体筛选的主要途径之一(Tiller等，Journal of Immunological Methods 329，(2008)，112–124)。2010年，Wu等(Science 329, (2010)856-861)利用流式细胞分选技术分选HIV感染者外周血中抗原特异性的单个记忆性B细胞，进而利用逆转录PCR技术直接扩增单个细胞的抗体基因VH和Vκ/Vλ，然后将上述基因片段插入全长IgG重组载体进行真核细胞转染和表达纯化，成功获得著名的HIV广谱中和单克隆抗体VRC01。由于该技术可以在最短的时间内获得单细胞来源的抗体基因和重组抗体蛋白，并且可以保证抗体重链和轻链的原始配对 (抗体功能最优)，单细胞分选和抗体基因直接扩增技术迅速成为抗体开发领域的重磅工具。迄今为止，该技术已在HIV，流感，MERS，埃博拉，登革热等病毒的广谱中和单克隆抗体的筛选上成功运用，该技术获得的多个高效抗体先后进入药物临床研究。单个B细胞来源的基因工程抗体为抗原快速检测和抗体制药领域带来了新的希望和广阔前景。

以往的抗体开发主要以亲和力指标和中和能力指标对抗体进行衡量，然而最近的研究发现，不具有中和能力的抗体同样也可以实现对机体的保护，其抗体依赖细胞介导的细胞毒性杀伤(ADCC)功能发挥了关键作用。著名的HIV临床试验RV144研究结果表明，疫苗的31％的保护效果与其所诱导抗体的ADCC能力显著正相关，提示抗体 ADCC功能的重要性。目前已有的H7N9亚型特异性单克隆抗体具有一定的体外中和活性，并能保护动物免受感染或减轻症状，然而这些抗体并未报道或并不具有介导细胞依赖的毒性杀伤(ADCC)能力，这将削弱以该类抗体为效应分子的药物的临床疗效。因此，既具有体外病毒中和活性又具有介导细胞毒性杀伤能力的全人源单克隆抗体将更有希望成为治疗性抗体药物。本发明的抗体具有体外病毒中和活性和介导病毒感染细胞杀伤的能力。

发明内容

本发明的目的是提供一种人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体 1F7L及其应用。