[发明专利]一种快速检测工业巴氏酵母芳香醇代谢基因的方法

权利要求书

1.一种快速检测工业巴氏酵母芳香醇代谢基因的方法，包括总RNA的提取、逆转录反应制备cDNA模板、多重PCR反应、毛细血管电泳、产物片段分析，其特征在于，针对工业巴氏酵母芳香醇代谢相关基因ADH1-Sc，ADH1-Sb，ADH3-Sc，ADH3-Sb，ADH4-Sc，ADH4-Sb，ADH5-Sc，ADH5-Sb，ARO8-Sc，ARO9-Sc，ARO9-Sb，ARO10-Sc，ARO10-Sb，ARO80-Sc和ARO80-Sb，逆转录反应制备cDNA模板应用引物为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30，多重PCR反应中应用引物SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ I DNO.21、SEQ IDNO.23、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29；

所述多重PCR反应的反应体系中，总反应体系为20μL，其中，25mM MgCl₂ 4.0μL、5×PCR缓冲液4.0μL、DNA聚合酶0.7μL、多重PCR反应中应用引物2μL、多重PCR反应中应用cDNA模板9.3μL；扩增参数为：95℃预变性10分钟；94℃变性30秒；退火温度56℃，30秒；71℃延伸1分钟，循环35次。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括作为内参照基因的工业巴氏酵母β-actin基因ACT1-Sc、ACT1-Sb，逆转录反应制备cDNA模板应用引物为SEQ ID NO.32、SEQ IDNO.34；多重PCR反应中应用引物SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.33。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述应用引物SEQ ID NO.2的浓度为125nM、SEQ ID NO.4的浓度为62.5nM、SEQ ID NO.6的浓度为500nM、SEQ ID NO.8的浓度为7.8125nM、SEQ ID NO.10的浓度为500nM、SEQ ID NO.12的浓度为7.8125nM、SEQ ID NO.14的浓度为125nM、SEQ ID NO.16的浓度为500nM、SEQ ID NO.18的浓度为500nM、SEQ IDNO.20的浓度为62.5nM、SEQ ID NO.22的浓度为500nM、SEQ ID NO.24的浓度为500nM、SEQID NO.26的浓度为500nM、SEQ ID NO.28的浓度为1.5μM、SEQ ID NO.30的浓度为500nM、SEQID NO.32的浓度为500nM、SEQ ID NO.34的浓度为0.5nM。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述应用引物SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.25、SEQ IDNO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.33的浓度均为200nM。