[发明专利]一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒及鉴定方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性扩增大肠杆菌K99菌毛抗原的引物对，所述引物对包括上游引物5’-CCAATGCTTCTGCGAATACAGG-3’，以及下游引物5’-CCGGGCGCTGGTTTTAGTTT-3’。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，其特征在于：还包括PCR预混液、双蒸水、阳性对照模板和阴性对照模板。

3.一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：

a)挑取大肠杆菌样品的单菌落，置入装有双蒸水的离心管中，在95～100℃水中热变性10min，然后在8000rpm条件下离心5min，取上清液作为DNA模板；

b)分别往样品反应管中加入DNA模板、上游引物、下游引物、PCR预混液、双蒸水；

c)将反应管置于PCR仪器进行扩增反应，反应条件设置为：95℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共34个循环，最后72℃延伸10min，在12～25℃时终止反应；

d)将上述反应后PCR产物用琼脂糖凝胶进行电泳，电泳条件为130V，18min，根据凝胶上的条带进行结果判定。

4.根据权利要求3所述的大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定方法，其特征在于步骤c前还包括步骤：b’)向阳性对照反应管中加入阳性对照模板、上游引物、下游引物、PCR预混液、双蒸水；向阴性对照反应管中加入阴性对照模板、上游引物、下游引物、PCR预混液、双蒸水。