[发明专利]一种抗细菌感染鱼类模型及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种抗细菌感染鱼类模型及其制备方法和用途，具体公开了一种提高鱼类抗菌能力的方法，其包括如下步骤：1)克隆npsn基因编码区(CDS)，并且将其插入到pTol2载体的热休克启动子后，在npsn编码区后加入编码标签蛋白Myc的序列，构建成pTol2‑hsp‑Myc‑npsn载体；2)将载体通过显微注射至鱼体内并以anti‑Myc免疫荧光染色，获得抗菌能力提高的鱼类。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种斑马鱼模型。

背景技术

Npsn(nephrosin)属于虾红素蛋白家族(astacin family)的一员，并且具有肽链内切酶活性。虾红素蛋白家族属于金属锌蛋白酶超家族的一员，在蛋白质消化、个体背腹轴确定以及形态发生中起着重要的作用。已有的相关研究分析了斑马鱼造血组织的ESTs序列以及整体原位杂交(Whole-mount In Situ Hybridization,WISH)实验，发现了Npsn特异性表达在斑马鱼血管以及造血组织中的基因，并且可以标记斑马鱼的中性粒细胞。

然而已有的实验技术仅仅说明了npsn表达在斑马鱼中性粒细胞中，并没有说明其在中性粒细胞中的作用，本发明构建npsn基因过表达的稳定可遗传的转基因品系，这种品系可以增强鱼类抗菌能力，显著提高细菌感染情况下的存活率，对渔业大规模养殖预防细菌感染非常有利。

发明内容

为了解决上述问题，提高鱼类抗菌能力，本发明一个方面提供了一种提高鱼类抗菌能力的方法，其包括如下步骤：

1)克隆npsn基因编码区(CDS)，并且将其插入到pTol2载体的热休克启动子后，在npsn编码区后加入编码标签蛋白Myc的序列，构建成pTol2-hsp-Myc-npsn载体；

2)将载体通过显微注射将pTol2-hsp-Myc-npsn载体和转座酶RNA的混合物注射至单细胞期受精鱼卵内，养至成鱼，即为F 0代；将F 0代与野生型鱼类交配获得F1代，将获得的受精卵或胚胎进行热激处理，并且以anti-Myc抗体染色筛选Myc阳性胚胎保留，即得到F1代具有抗菌能力的鱼类；

可选地，所述F1代具有抗菌能力的鱼类继续进行繁殖获得经热激处理后稳定具有抗菌能力的鱼类；

优选地，所述热激处理为36-42℃处理0.5-2小时，每8-16小时热激处理一次，共热激两次；热激处理频率为每周热激处理两次。

更优选地，所述热激处理为39℃处理1小时，每12小时热激一次，热激处理频率为每周热激处理两次。

本发明另一个方面提供了一种抗细菌感染的鱼类模型的制备方法，其包括如下步骤：

1)克隆npsn基因编码区(CDS)，并且将其插入到pTol2载体的热休克启动子后，在npsn编码区后加入编码标签蛋白Myc的序列，构建成pTol2-hsp-Myc-npsn载体；

2)将载体通过显微注射将pTol2-hsp-Myc-npsn载体和转座酶RNA的混合物注射至单细胞期受精鱼卵内，养至成鱼，即为F 0代；将F 0代与野生型鱼类交配获得F1代，将获得的受精卵或胚胎进行热激处理，并且以anti-Myc抗体染色筛选Myc阳性胚胎保留并养殖至成鱼，即得到抗细菌感染的鱼类模型；

可选地，所述F1代具有抗菌能力的鱼类继续进行繁殖获得经热激处理后稳定抗细菌感染的鱼类模型；

优选地，所述热激处理为36-42℃处理0.5-2小时，每8-16小时热激处理一次，共热激两次；热激处理频率为每周热激处理两次。

更优选地，所述热激处理为39℃处理1小时，每12小时热激一次，共热激两次，热激处理频率为每周热激处理两次。

本发明再一个方面提供了一种npsn过表达鱼类的制备方法，其包括如下步骤：