[发明专利]一种以人Ad5复制缺陷型腺病毒为载体的寨卡病毒病疫苗

说明书

本发明公开了一种能够表达寨卡病毒Env蛋白，并且密码子得到优化的核苷酸序列，所述序列可以与密码子得到优化的寨卡病毒prM蛋白以及prM蛋白内源信号肽融合，插入穿梭载体pDC316后，与辅助载体pBHGlox_E1,3Cre共转染HEK293细胞，包装出以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体的重组腺病毒，所述重组腺病毒载体能够在感染细胞中高效表达寨卡病毒的包膜蛋白。插入所述核苷酸的重组腺病毒作为疫苗单次免疫动物后即可快速诱发强烈的体液免疫和细胞免疫反应。所述重组腺病毒载体寨卡疫苗可以大规模快速制备，能够用于寨卡疫情爆发时大规模人群的应急接种及平时人群的预防性免疫。

技术领域

本发明公开了一种以人Ad5复制缺陷型腺病毒为载体的寨卡病毒病疫苗，本发明属于生物工程技术领域。

背景技术

寨卡病毒(Zika Virus，ZIKV)是一种单股正链RNA病毒，与黄热病毒(YellowFever)、登革热病毒(Dengue Fever)、日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、森林脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus，TBEV)和西尼罗河病毒(West NileVirus，WNV)等同属于黄病毒(Flavivirus)科黄病毒属。ZIKV于1947年首次发现于乌干达寨卡森林的猴子身上，主要通过伊蚊传播，少数情况下也可以通过母婴传播、性传播和输血传播。ZIKV最初仅在少数地区有小规模的爆发和流行:1952年，在乌干达、尼日利亚和印度进行的血清流行病学调查显示人类有感染寨卡病毒；1951-1983年，寨卡病毒在非洲和亚洲多个国家传播；2007年，大洋洲的密克罗尼西亚爆发了寨卡疫情，为首次非洲和亚洲之外的爆发；2013-2014年，法属波利尼西亚、复活节岛、库克群岛、法属新喀里多尼亚有疫情的小规模爆发。2015年美洲疫情为首次大规模的寨卡疫情爆发，短时间内便席卷南美，后又扩散至北美和世界其他地区，全球累计有73个国家和地区有疫情报告，根据泛美卫生组织(PanAmerican Health Organization，PAHO)的数据，截止2017年3月23日，美洲各地政府累计报告确诊病例1003509例。

大部分ZIKV的感染没有明显的症状或者仅有发热、头痛、皮疹、关节痛等轻微症状，这也是之前ZIKV并未受到国际社会重视的原因之一。但在此次美洲疫情的流行中，研究人员发现寨卡感染也能够导致非常严重的疾病：孕妇感染导致的新生儿小头畸形及其他形式的脑部畸形，成年人的Guillain-Barre综合症，近期的研究还发现病毒可以长达半年时间存在于精液等体液中，而且具有传染性；此外，动物模型的研究也发现ZIKV能够损害雄性小鼠的生殖系统。

ZIKV基因组的长度在11Kb左右，所编码的10个蛋白被翻译为一条多肽链，然后经由宿主和病毒编码的蛋白酶切割为3个结构蛋白(衣壳蛋白(Capsid，C)、前膜/膜蛋白(Premembrane/Membrane protein，prM/M)和包膜蛋白(Envelope，E))和7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。基于NS5基因序列的遗传分析认为：ZIKV可以分为三个系(Lineage)，东非系、西非系和亚洲系。ZIKV只有一个血清型，因此，单价疫苗即有可能形成针对当前所有毒株的防护。