[发明专利]一种EBV检测相关的特异性多肽及其相关应用

说明书

技术领域

本发明涉及生命科学技术领域，尤其涉及一种EBV检测相关的特异性多肽及其相关应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barrvirus；EBV)属于疱疹病毒家族，主要侵犯B淋巴细胞，引起传染性单核细胞增多症，并与多种淋巴瘤的发生有密切关系。EBV在人群中广泛感染，约90％以上的成人血清EBV抗体呈阳性。

生理状态下，在机体免疫系统作用下，EBV再激活和EBV特异CD8+T细胞的抗病毒免疫控制处于一种平衡状态，使EBV处于未活化状态而长期潜伏在人体淋巴组织中，受感染者终生携带病毒而不发病。但当机体免疫功能低下时，EBV特异CD8+T细胞数量减少或功能降低，体内原有的平衡被打破，EB病毒就重新再激活，其体内潜伏感染细胞中的EB病毒基因组被激活而表达，转化为增殖性感染。由此可见，EBV特异性CD8+T细胞在抑制EBV再激活中的作用至关重要，机体抗EBV的特异性CD8+T细胞数量的水平状况是监控EBV是否会再激活的一项重要指标。

因此，检测EBV特异性CD8+T细胞的数量，明确特异性CD8+T细胞的数量与EBV病毒载量的相关关系，对相关疾病临床症状的病因分析及疾病的诊断有重要意义。

以往EBV检测方法主要包括采用免疫酶染色法或免疫荧光技术检测血清中EBV特异性抗体，以及核酸杂交和PCR等方法检测细胞内EBV基因组及其表达产物。

然而，这些检测方法只能用于判断机体是否存在EBV的感染，却不能用于评估机体感染EBV是否有潜在发病的可能。定量测定外周血中EBV特异CD8+T细胞可以评估针对EBV的特异免疫应答，预测哪些是可能发生EBV感染的高危病人，在临床上有极其重要的意义，特别是在免疫缺陷病人和移植病人中。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题设计合成了一种中国人高频率的HLA class I基因型所递呈的EBV病毒抗原表位序列，可用于检测EBV特异性CD8+T细胞的数量，监测评估机体内感染的EBV再激活及致病的可能。

具体地，本发明的第一个方面提供了一种用于检测外周血EBV特异性CD8+T细胞数量的特异性多肽，所述特异性多肽为序列如SEQ ID No.1所示；

SEQ ID No.1：Val Thr Phe SerAla Gly Thr Phe Lys。

SEQ ID No.1也可以简写为：VTFSAGTFK。

进一步地，所述特异性多肽为序列如SEQ ID No.1所示多肽的多聚体，所述多聚体优选地可以是二聚体、三聚体、四聚体或更多聚体。

另一方面，本发明还提供上述的特异性多肽在制备检测EBV感染的试剂盒或药物中的应用；优选地，所述检测EBV感染为特异性检测中国人EBV感染。

本发明同时还提供一种检测EBV的试剂盒，所述试剂盒包含上述的特异性多肽。

优选地，上述试剂盒还包括荧光标记，其中，所述荧光标记可以是荧光素、放射性核素、酶、化学发光物质、金属颗粒中的任意一种或几种；所述荧光素选自FITC、RB200、TRITC中的任意一种或几种；所述放射性核素选自3H、14C、32P、125I、131I中的任意一种或几种；所述酶选自HRP、AP中的任意一种或几种。

优选地，上述试剂盒还包括anti-CD8抗体和/或荧光标记的anti-CD8抗体。

优选地，上述试剂盒还包括缓冲液，所述缓冲液选自PBS缓冲液、FACS缓冲液中的任意一种或几种。

本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：

本发明提供了一种能够识别EBV TCR的HLA class I分子/EBV特异多肽的氨基酸及其多聚体，用以检测病人外周血中EBV特异CD8+T细胞的数量，从而用以测定病人外周血中具有EBV特异CD8+T细胞数量的临床界限，监测评估机体内感染的EBV再激活及致病的可能。

附图说明

图1为实施例一中3组多肽序列多聚体与外周血单个核细胞共培养48小时后，反应阳性的细胞增殖结果。

图2为实施例二中SEQ ID No.1序列多聚体检测外周血中EBV特异CD8+T细胞的结果。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。

实施例一在细胞水平上验证T细胞对SEQ ID No.1序列的反应性