[发明专利]生活饮用水中总大肠菌群能力验证样品及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种生活饮用水中总大肠菌群能力验证样品及其制备方法。

背景技术

生活饮用水微生物学检验领域非常特殊。目前，虽然国内外已有认可机构组织生活饮用水微生物学能力验证和大规模的制备微生物能力验证样品的先例，但多为总大肠菌群定性样品或纯菌株，但总大肠菌群定量检测样品制备难度较高，，尚无一种较好的制备方法，均匀性和稳定性无法达到要求总大肠菌群即总大肠菌群标准样品仍属空白领域。

总大肠菌群并非细菌学分类命名，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化特征及血清学方面并非完全一致，其定义为：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧或兼性厌氧菌的革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包括大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌和产气肠杆菌等。如果制备的总大肠菌群样品中，目标菌群易发生变化(繁殖和死亡等)，就会导致样品的保存期短，样品的均匀性和稳定性差。因此，综合考虑细菌的生化特性，选取性质相对稳定的菌群作为目标菌群对保证样品的均匀性和稳定性十分重要。总大肠菌群样品制备的工艺技术要求比较高，并且样品的均匀性和稳定性与冻干的菌种、冻干的工艺条件、冻干保护剂的使用、再水化的介质等均有密切的关系。

生活饮用水中总大肠菌群指标，直接反映着生活饮用水的卫生质量与潜在致病风险。如果总大肠菌群数超过一定限量，就加大了致病性大肠埃希氏菌的存在风险，并最终导致食源性疾病发生。因此，制备均匀性与稳定性俱佳的总大肠菌群样品，可以避免总大肠菌群检验的随意性和不确定性，真实地反映检测实验室的能力。这对提高实验室质量控制水平，保障生活饮用水安全，甚至于打破国际贸易壁垒、提高我国生活饮用水国际竞争力都具有特殊重要的意义。

发明内容

本发明的目的是克服总大肠菌群测定样品中总的活的细菌数目在运输、储存和测试等过程中菌落数都可发生变化的问题，提供一种生活饮用水中总大肠菌群能力验证样品，均匀性、稳定性符合能力验证要求，本发明的另一个目的是提供该样品的制备方法，工艺简单，成功率高。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：生活饮用水中总大肠菌群能力验证样品，其特征是：包括目标菌群和背景菌群，所述目标菌群由大肠埃希氏菌(E.coil)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pnenmoniae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、奇异变形杆菌 (Proteus mirabilis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)组成，所述背景菌群由金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)组成。

所述样品以海藻糖、脱脂奶粉和无菌水为基质，其中海藻糖体积分数为12％、脱脂奶粉体积分数为0.1％。

所述样品中目标菌群的目标浓度为10²～10³CFU/100mL，背景菌群的目标浓度为10² CFU/mL。

一种生活饮用水中总大肠菌群能力验证样品的制备方法，其特征是：包括样品添加菌株的选择、冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验四个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌悬液配制—冻干和包装—储存，具体过程为：

(1)菌株复苏传代

将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；

(2)增菌

目标菌群培养至对数生长期末，背景菌群培养至稳定期，从斜面刮取菌落，加到少量的冻干保护剂中制成相应单一菌种的菌液；

(3)菌悬液配制

将上一过程得到的菌液与冻干保护剂混合，按目标菌群的目标浓度10²～10³CFU/100mL和背景菌群的目标浓度10²CFU/mL配制菌悬液，分别配制5个目标菌的菌悬液和2个背景菌的菌悬液，分别按1:1体积比混合形成目标菌群悬液和背景菌群悬液，再将目标菌群悬液与背景菌群悬液按1:1体积比混合，得到混合菌悬液，置于磁力搅拌器上不断搅拌下分装到样品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要盖实；

(4)冻干和包装

将装有混合菌悬液的样品瓶开盖放入冻干机中，冷冻干燥40～50h，当样品冷冻干燥结束后，直接进行箱内加塞，关闭机器，样品瓶中样品为真空状态；

(5)储存